IgA腎病組織蛋白質組和尿液蛋白質組研究.pdf

1、背景和目的：IgA腎病(IgA nephropathy，IgAN)是目前世界范圍內最常見的原發(fā)性腎小球疾病，是引起終末期腎衰竭的重要原因之一，30％～40％的IgAN患者在診斷該病后20年內發(fā)展成終末期腎病(end stage renal disease，ESRD)，給家庭和社會帶來了沉重的負擔。IgAN的確診目前仍依賴于腎活檢，但腎穿刺活檢為有創(chuàng)性檢查，存在一定風險和禁忌證。IgAN起病隱匿，易導致診治不及時，因此早期篩查、診治對于防

2、控，減少ESRD患者數量尤為重要。因此，探尋IgAN的發(fā)病機制和早期無創(chuàng)生物標志物具有重要意義。本研究采用Raybiotech細胞因子抗體芯片技術對IgAN患者和對照組腎臟組織進行檢測;采用高分辨質譜技術對IgAN患者、原發(fā)性膜性腎病(idiopathic membranous nephropathy，IMN)患者和正常人群尿液進行對照檢測分析;篩選IgAN的生物標志物，探討其應用價值，進一步闡明IgAN的發(fā)病機制。
　　方法：(

3、1)入選年齡18～60歲，解放軍總醫(yī)院住院腎活檢確診為IgAN的患者10例，取活檢腎組織進行研究;年齡18～60歲的于解放軍總醫(yī)院泌尿外科行腎癌腎臟切除的患者10例，取腎癌患者癌旁6cm以外的正常腎臟組織作為對照組進行研究。收集上述人群的臨床基本信息及化驗檢查結果。上述人群腎臟組織利用Raybiotech細胞因子抗體芯片進行檢測，篩選差異蛋白質，并對差異蛋白質進行GO(Gene Ontology)分析。結合分析結果，選取了IL-33利用

4、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)進行驗證。
　　(2)對解放軍總醫(yī)院腎科腎穿刺活檢患者進行篩選，入組20-60歲的48例診斷為IgANⅡ～Ⅲ級的患者和9例診斷為IMNⅠ～Ⅱ期的患者;另入組40例20-60歲尿常規(guī)、血常規(guī)及血生化結果無明顯異常且無基礎疾病的正常人作為健康對照。收集上述人群晨起第1次尿中段尿，通過Lable free LC/MS高分辨質譜技術對29例IgAN患者9例IMN患者和40例健康對照進行尿液蛋白質檢測，篩選差異

5、蛋白質，對差異蛋白質進行GO富集分析;依據蛋白質譜和數據分析的結果，結合IgAN可能的發(fā)病機制，選取48例IgAN患者和40例正常人尿液利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對轉鐵蛋白(transferrin，TF)進行驗證。
　　結果：(1)對10例病理診斷為IgANⅡ～Ⅲ級、10例正常腎臟組織進行細胞因子表達譜檢測，共發(fā)現(xiàn)了25個差異蛋白質，GO分析結果表明：這些蛋白質主要與應激、細胞粘附、蛋白質代謝、信號轉導相關。ELISA驗證

6、結果顯示：IgAN患者腎組織中IL33表達水平顯著高于對照組。
　　(2)利用高分辨質譜技術檢測發(fā)現(xiàn)，與正常對照組相比對，在IgAN和IMN疾病組，檢測到53種蛋白質差異表達(p＜0.05);在IMN組中找到15種顯著差異表達但在IgAN組中無差異表達的蛋白質(p＜0.05);在IgAN組中找到13種差異表達但在IMN組中無差異表達的蛋白質(p＜0.05)。IMN組和IgAN組組間，找到了9種蛋白質差異表達(p＜0.05)。GO富

7、集發(fā)現(xiàn)這些差異蛋白質主要參與凝血與血栓形成、炎癥反應、補體系統(tǒng)激活、蛋白轉運、鐵代謝、糖及脂質代謝生物過程。差異蛋白C3、EGF、APOD等與以往研究結果相符，ORM1、ORM2可能是診斷IgAN和IMN的生物標志物。ELISA驗證結果顯示：IgAN患者尿液中TF表達水平顯著高于正常對照組，TF具有非常大的診斷價值。
　　結論：IL-33可能是IgAN發(fā)病機制中起重要作用的細胞因子，TF可能是優(yōu)于24h尿蛋白定量診斷IgAN和IM