冬蟲夏草蛋白質(zhì)組的初步研究.pdf

1、冬蟲夏草[Cordycepssinensis(Berk)Sacc.]，又名蟲草、冬蟲草、夏草冬蟲，是麥角菌科(Clavicipitaceae)蟲草屬(Cordyceps)的一種蟲生真菌(中國被毛孢為其無性階段)。冬蟲夏草具有補腎、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理作用，長期以來一直被視為珍貴的中藥和藏藥，享譽全世界，特別在東南亞地區(qū)影響廣泛。 蟲草需要在我國西部地區(qū)(西藏、青海、甘肅、新疆)特殊的生態(tài)環(huán)境下才能生長。因此，天然蟲草資源極為短缺，

2、每公斤售價高達3萬元以上。雖然蟲草菌絲早已實現(xiàn)人工培養(yǎng)，并可獲得發(fā)酵產(chǎn)物，但其售價遠不如天然蟲草(售價只有幾十元/公斤)。盡管蝙蝠蛾幼蟲和蟲草菌絲的人工培養(yǎng)均已獲得成功，并實現(xiàn)了在人工條件下誘導中國被毛孢與蝙蝠蛾幼蟲寄生形成完全相同的的天然蟲草體。但蟲草的這些藥用價值的具體機理大多數(shù)都還未進行過深入研究。因此也就還無法判斷菌絲體是否不需要經(jīng)過對蝙蝠蛾幼蟲的特異性寄生就能具有和天然蟲草完全相同的藥理功能。 本研究首先對中國被毛孢的

3、液體培養(yǎng)條件進行摸索，確定菌絲體大量生長的較適培養(yǎng)基。然后利用蛋白質(zhì)組學(Proteomics)研究技術(shù)手段，對天然蟲草和蟲草菌的蛋白質(zhì)表達圖譜進行系統(tǒng)研究，對其整體蛋白質(zhì)組分進行分離、比較和鑒定，建立蟲草蛋白質(zhì)凝膠指紋圖譜。采用Edman微量測序技術(shù)，對用雙向凝膠電泳分離出來的差異位點蛋白質(zhì)，進行氨基酸序列分析；并根據(jù)蟲草蛋白質(zhì)基本數(shù)據(jù)資料(等電點和分子量)，進行數(shù)據(jù)庫檢索分析。 本研究最終得出了中國被毛孢的較適培養(yǎng)基為：2％

4、蔗糖、1％蛋白胨、1.5％酵母膏、0.275％葵瓜子油、pH為5.5(加一定量的無機鹽)。此培養(yǎng)基可以使中國被毛孢菌絲體干重達到5.42g/L。 將天然蟲草和中國被毛孢的雙向電泳圖譜比較發(fā)現(xiàn)，天然蟲草僅檢出18個蛋白點，而中國被毛孢則有188個蛋白點。這可能是由于中國被毛孢菌絲體的蛋白質(zhì)是從鮮活的菌絲體提取，而天然蟲草的蛋白質(zhì)是從干固的蟲草提取，其在形成蟲草的過程中可能造成大量的蛋白質(zhì)損失或被破壞。雖然在天然蟲草雙向電泳圖譜中分

5、離出的蛋白點較少，卻發(fā)現(xiàn)了4個蟲草菌雙向電泳圖譜不存在的蛋白點。這些差異蛋白質(zhì)很顯然是蟲草菌寄生到蝙蝠蛾幼蟲后才產(chǎn)生的，這可能是蟲草菌在寄生蝙蝠蛾幼蟲過程中形成的特殊產(chǎn)物，對其深入分析可能對揭示二者之間特異性寄生關(guān)系及對于分析天然蟲草的特殊藥理作用具有重要意義。此外對天然蟲草與中國被毛孢的雙向電泳圖譜進行分區(qū)分析。結(jié)果表明中國被毛孢的蛋白大部分集中在14.4-43.3kD、pH5-7的區(qū)域內(nèi)；天然蟲草蛋白集中在分子量14.4-43kD、