擬南芥紅光突變體蛋白質(zhì)組學(xué)初步分析.pdf

1、植物功能基因組學(xué)研究在本世紀(jì)發(fā)展十分迅速，然而在轉(zhuǎn)錄水平提供的基因表達(dá)的信息確還不能完全確定一個(gè)基因的功能。因?yàn)榛蛑皇沁z傳信息的攜帶者，蛋白質(zhì)才是生命功能的真正體現(xiàn)者，且在從基因到蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄及翻譯過程中，在不同機(jī)體，不同組織，甚至不同階段都有不同<'[1]>。所以廣范圍研究蛋白質(zhì)研究表達(dá)和功能模式的蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)成為功能基因組學(xué)的重要領(lǐng)域。它旨在闡明生物體內(nèi)全部蛋白質(zhì)的表達(dá)模式及功能模式，其內(nèi)容包括鑒定蛋白質(zhì)的表達(dá)、存在方式(修飾方

2、式)、結(jié)構(gòu)、功能及相互作用等。蛋白質(zhì)組是指一個(gè)基因組所編碼的所有蛋白質(zhì)的總和。蛋白質(zhì)組方法學(xué)包括蛋白質(zhì)組分離技術(shù)和蛋白質(zhì)組鑒定技術(shù)。用于蛋白質(zhì)分離的雙向凝膠電泳技術(shù)是蛋白質(zhì)組研究的核心，而鑒定技術(shù)則是蛋白質(zhì)組技術(shù)的支柱。 為了進(jìn)一步研究植物紅光信號(hào)途徑，本文利用雙向聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)，分離子紅光受體雙突變體phyAphyB與col-4的蛋白質(zhì)組，得到了高重復(fù)性的雙向凝膠圖譜。通過初步的斑點(diǎn)配比，獲得了兩種材料的差異蛋白質(zhì)點(diǎn)圖

3、譜；并選取55個(gè)變化明顯的蛋白質(zhì)點(diǎn)用原位酶解，抽提蛋白質(zhì)片段進(jìn)行MALDI-TOF-TOF-MS質(zhì)譜分析，利用肽質(zhì)量指紋圖數(shù)據(jù)在數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行檢索，其中包括普通反應(yīng)酶、過氧化物酶、轉(zhuǎn)錄因子、綁定蛋白，分子伴侶蛋白等。同時(shí)為了發(fā)現(xiàn)更多植物紅光信號(hào)途徑與藍(lán)光信號(hào)途徑的交叉因子，還以擬南芥野生型(Arabidopsis，Col-4)，紅光受體突變體(phyB)和藍(lán)光受體突變體(cry1-304)七天幼苗的全蛋白為材料，在增溶樣品，設(shè)定合適的電泳