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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)和方法,評(píng)價(jià)1周離心運(yùn)動(dòng)及4周遞增負(fù)荷離心運(yùn)動(dòng)前后蛋白質(zhì)的差異表達(dá),較全面分析適應(yīng)性運(yùn)動(dòng)對(duì)骨骼肌蛋白組的影響。
方法:
雄性SD大鼠,體重220-250g。按體重隨機(jī)分為4組:1周對(duì)照組(1C),1周離心運(yùn)動(dòng)組(E1W,-16°,16m/min,1h),4周對(duì)照組(4C),4周遞增負(fù)荷離心運(yùn)動(dòng)組(E4W,第一周:-16°,16m/min,1h;第二周:-16°,20m/min,1h
2、;第三周:-16°,20m/min,90min;第四周:-16°,20m/min,120min)。戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,腹主動(dòng)脈取血后迅速取腓腸肌,在液氮中研磨至粉末狀,三氯乙酸-丙酮沉淀過(guò)夜,加入蛋白裂解液(8 M urea,2M thiourea,4% CHAPS,1 mM PMSF,50μg/ml leupeptin,10μg/ml pepstatin,50 mM DTT)。Bradford法測(cè)蛋白濃度,進(jìn)行等電聚焦,聚焦完成后
3、直接進(jìn)行SDS-PAGE(12%)電泳,銀染,掃描后用PDQuest軟件分析,對(duì)顯著變化的蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜鑒定。
結(jié)果:
肌纖維橫截面積在一周中等強(qiáng)度離心運(yùn)動(dòng)以及四周遞增負(fù)荷離心運(yùn)動(dòng)后12小時(shí)都發(fā)生肥大現(xiàn)象,肌纖維橫截面積增大。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組各檢測(cè)出大約500個(gè)蛋白點(diǎn)。通過(guò)檢測(cè)和分析,離心運(yùn)動(dòng)導(dǎo)致許多蛋白質(zhì)的豐度發(fā)生變化。一周離心運(yùn)動(dòng)后,腓腸肌有199個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào),182個(gè)蛋白點(diǎn)上調(diào)。在四周遞
4、增負(fù)荷離心運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練后,有159個(gè)蛋白點(diǎn)上調(diào)和203個(gè)蛋白點(diǎn)下調(diào)。這些蛋白質(zhì)涉及代謝、細(xì)胞結(jié)構(gòu)和物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)的變化。一周和四周離心運(yùn)動(dòng)后,MHCI比例和含量顯著增加,而MHCIIx/b的比例和含量都有所下降。MHCIIb的含量在一周離心運(yùn)動(dòng)中變化不大,但在四周遞增負(fù)荷離心運(yùn)動(dòng)中顯著增加。
結(jié)論:
1)適應(yīng)性離心運(yùn)動(dòng)后,肌纖維橫截面積增大,慢肌比例增多,并且有氧代謝相關(guān)蛋白含量增加。
2)適應(yīng)性過(guò)程中,結(jié)構(gòu)蛋白有明
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