應(yīng)用iTRAQ技術(shù)篩選兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇差異性表達(dá)蛋白質(zhì).pdf

1、目的：本文旨在篩選兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇中差異性表達(dá)的蛋白，從而以尋找其生物學(xué)標(biāo)志物以及治療的潛在靶點(diǎn)。
　　方法：以兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織（皮質(zhì)發(fā)育障礙組）以及創(chuàng)傷后因顱內(nèi)高壓術(shù)后的兒童正常腦組織（對(duì)照組）為對(duì)象。采用同位素相對(duì)標(biāo)記與絕對(duì)定量技術(shù)（isobaric tag for relative and absolute quantification，iTRAQ）結(jié)合雙向液相色譜與串聯(lián)質(zhì)譜（2D liquid chrom

2、atograph electrospray tandem mass spectrometry，2D-LC-MS/MS）來(lái)鑒定兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇差異性表達(dá)蛋白，對(duì)所獲得差異性蛋白質(zhì)進(jìn)行生物信息學(xué)分析，從而篩選出具有潛在研究?jī)r(jià)值的候選蛋白。最后應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡，免疫組化方法驗(yàn)證這些候選蛋白在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇中的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：通過iTRAQ及2D-LC-MS/MS方法，一共鑒定出153種蛋白質(zhì)在兒童皮

3、質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織及兒童正常腦組織中有表達(dá)差異（其中在兒童皮質(zhì)發(fā)育障礙性癲癇腦組織中64種蛋白質(zhì)上調(diào)，89種蛋白質(zhì)下調(diào)；P<0.05）。通過GO（Gene ontology）功能分析提示153種差異性蛋白主要參與酶催化活性的調(diào)節(jié)，蛋白質(zhì)功能相互作用網(wǎng)狀圖發(fā)現(xiàn)transferri(TF)、apolipoprotein A1(APOA1)、alpha-2-macroglobulin(A2M)、ATPase(ATP6V1A)、viment