活化激酶C1受體在切應(yīng)力調(diào)控血管重建中的作用機制研究.pdf

1、研究表明，血流切應(yīng)力變化是影響血管重建的重要因素，與動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。血管內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cells，ECs)直接承載血流切應(yīng)力刺激，并通過細(xì)胞間相互作用影響血管平滑肌細(xì)胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）。研究ECs與VSMCs間的相互交流，以及切應(yīng)力下的細(xì)胞功能變化，有助于闡明血管重建的力學(xué)生物學(xué)機制。
　　我們通過前期蛋白質(zhì)組學(xué)的工作，得到了15 dyn

2、/cm2正常切應(yīng)力（normal shear stress，NSS）和5 dyn/cm2低切應(yīng)力（low shear stress，LowSS）條件下體外培養(yǎng)的血管組織差異表達(dá)的蛋白質(zhì)譜。對比發(fā)現(xiàn)，活化激酶C1受體（receptor for activated C kinase1，RACK1）在LowSS作用下的血管組織中呈高表達(dá)，提示 RACK1可能參與了LowSS誘導(dǎo)的血管重建。
　　本文應(yīng)用ECs/VSMCs聯(lián)合的培養(yǎng)流動腔

3、系統(tǒng)，檢測靜態(tài)（static）、NSS和LowSS條件下聯(lián)合培養(yǎng)大鼠ECs和VSMCs表達(dá)RACK1及Akt磷酸化水平。同時，為探討應(yīng)力調(diào)控的上述變化是通過 ECs與VSMCs的直接接觸或是通過旁分泌作用，本文設(shè)計了ECs//VSMCs隔開培養(yǎng)的體系，同樣檢測靜態(tài)、NSS和LowSS條件下ECs和VSMCs的RACK1表達(dá)狀況及Akt磷酸化水平。此外，本文還在靜態(tài)條件下，應(yīng)用RNA干擾（RNA interference，RNAi）技術(shù)特

4、異性抑制VSMCs內(nèi)RACK1表達(dá)，探討RACK1對細(xì)胞凋亡和Akt磷酸化水平的作用。
　　結(jié)果顯示：①切應(yīng)力與VSMCs對ECs的RACK1表達(dá)均無顯著影響；② LowSS與細(xì)胞直接接觸共同誘導(dǎo)VSMCs表達(dá)RACK1，NSS、LowSS與旁分泌共同阻遏VSMCs表達(dá)RACK1；③ NSS和LowSS都可能抑制ECs的Akt磷酸化；④旁分泌參與NSS對VSMCs的Akt磷酸化的促進(jìn)作用；⑤抑制VSMCs的RACK1表達(dá)下調(diào)細(xì)胞凋

5、亡和caspase-3表達(dá)，上調(diào)Akt磷酸化。
　　上述結(jié)果表明，LowSS條件下，ECs通過直接接觸作用誘導(dǎo)VSMCs的RACK1表達(dá)；切應(yīng)力對ECs與VSMCs的Akt磷酸化水平的誘導(dǎo)作用不同，NSS和LowSS均抑制ECs的Akt磷酸化，但NSS的抑制作用更強，而NSS則促進(jìn)VSMCs的Akt磷酸化；RACK1可能通過PI3K/Akt信號通路參與切應(yīng)力對細(xì)胞凋亡的調(diào)控。結(jié)果提示，ECs與VSMCs之間的相互接觸和聯(lián)系，對維持