PJ34對A549-DDP細胞耐藥相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、研究背景及目的：
　　肺癌是最常見的腫瘤疾病，嚴(yán)重危害人們的生命健康?；诜伟┑纳飳W(xué)特征，治療效果和預(yù)后特點，世界衛(wèi)生組織將其分為小細胞肺癌（Small cell lung cancer）和非小細胞肺癌（Non-small cell lung cancer）。腫瘤是一種全身性疾病，肺癌也不例外。即使是早期的肺癌在體內(nèi)也可能存在微小轉(zhuǎn)移灶，因此肺癌的治療以綜合治療為主。近10年來，肺癌的診斷技術(shù)和治療方法有了很大提高，但是肺癌患者

2、總體預(yù)后仍不理想。盡管Ⅰ、Ⅱ期患者通過手術(shù)有治愈的可能，然而在實際臨床工作中，只有10％-20％的患者診斷時屬于早期，絕大部分患者就診時已屬晚期無法行根治性手術(shù)。以鉑類為主的兩藥聯(lián)合化療成為其主要治療手段，但多藥耐藥的產(chǎn)生往往導(dǎo)致化療的失敗。雖然針對肺癌多藥耐藥已有大量研究，但是其根本機制仍未明了。研究發(fā)現(xiàn)肺耐藥蛋白(LRP)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRP)、P-糖蛋白(P-gp)、谷-胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶-π(GST-π）和拓撲異構(gòu)酶Ⅱ(TO

3、POⅡ)在腫瘤的耐藥中發(fā)揮重要作用。聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1[Poly（ADP-ribose）merase-1，PARP-1]是存在于多數(shù)真核細胞內(nèi)的蛋白核酶，其維持基因組穩(wěn)定,調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。課題組前期研究表明，PARP-1在肺腺癌順鉑耐藥細胞株中表達明顯上調(diào)，第三代PARP-1抑制劑PJ-34可誘導(dǎo)細胞凋亡，抑制DNA損傷修復(fù)，增強肺腺癌順鉑耐藥細胞對順鉑的敏感性。
　　本研究詣在探討五種耐藥相關(guān)基因在肺腺癌順鉑耐藥細胞及親

4、本細胞間的表達差異以及PJ34對耐藥相關(guān)基因表達的影響，尋找對順鉑繼發(fā)耐藥起關(guān)鍵作用的基因，為PJ34在鉑類耐藥非小細胞肺癌患者的應(yīng)用，腫瘤的個體化治療提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1、體外培養(yǎng)人肺腺癌細胞株 A549及其順鉑耐藥株 A549/DDP，使用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色（tetrazolium-based eolorimetric assay,MTT）法藥敏實驗驗證肺癌順鉑耐藥細胞系的耐藥指數(shù)。
　

5、　2、實時熒光定量PCR法（QRT-PCR）檢測肺腺癌順鉑耐藥株A549/DDP及其親本株A549內(nèi)五種耐藥相關(guān)基因P-gp、LRP、MRP、GST-π、TOPOⅡαmRNA的水平以及給予不同劑量和不同處理時間的PJ34后A549/DDP細胞內(nèi)五種耐藥相關(guān)基因的變化。
　　研究結(jié)果：
　　1、與親本細胞株A549相比，順鉑耐藥細胞株A549/DDP耐藥指數(shù)提高了9.7倍。
　　2、A549/DDP及A549細胞內(nèi)LRP

6、、MRP、P-gp、GST-π、TOPO-Ⅱα均有表達，但LRP、MRP、P-gp、GST-π在A549/DDP細胞內(nèi)的表達水平明顯高于A549細胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，TOPO-Ⅱα在兩種細胞內(nèi)的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3、給予不同濃度(0、3、6、12、24 mg/L)PJ34處理24 h后，A549/DDP細胞內(nèi)MRP表達水平下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P-gp表達水平下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且二者呈明顯的濃度依賴性，而LRP

7、、GST-π、TOPO-Ⅱ表達量隨PJ34濃度的增加未見明顯變化。
　　4、3 mg/L的PJ34分別處理24、48、72 h后A549/DDP細胞內(nèi)MRP表達量隨給藥時間的延長逐漸下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P-gp表達量隨給藥時間的延長逐漸下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，呈明顯的時間依賴性，而LRP、GST-π、TOPO-Ⅱα表達量隨時間延長未見明顯變化。
　　5、PJ34單藥組較對照組MRP mRNA水平降低差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P-

8、gp mRNA水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;PJ34聯(lián)合順鉑組較順鉑單藥組MRP mRNA水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P-gp mRNA水平降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，PJ34單藥組較PJ34聯(lián)合順鉑組MRP、P-gp mRNA水平未見明顯變化。
　　研究結(jié)論：
　　1、LRP、MRP、P-gp、GST-π可能參與了A549/DDP細胞對順鉑的繼發(fā)耐藥。
　　2、PJ34可能通過下調(diào)MRP、P-gp mRNA轉(zhuǎn)錄水平而間接增