姜黃素下調(diào)mir-186-表達促進人肺腺癌細胞A549和A549-DDP凋亡的研究.pdf

1、背景與目的：
　　姜黃素是從姜黃科植物的根莖中提取的一種天然化合物。體內(nèi)、外的臨床研究表明其具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種作用。miRNA-186*（mir-186*）是通過microarray芯片技術(shù)篩選出的同時在人肺腺癌A549和A549/DDP細胞中明顯差異表達的基因。本研究旨在闡明姜黃素可能通過調(diào)控mir-186*的表達而促進A549和A549/DDP細胞凋亡。
　　方法：
　　1.用姜黃素處理A549和A54

2、9/DDP細胞并以DMSO處理作為對照。
　　2.microarray芯片技術(shù)檢測A549和A549/DDP細胞中microRNAs(miRNAs)表達量的變化。
　　3.篩選出A549和A549/DDP細胞中明顯差異表達的miRNAs。
　　4.實時定量PCR驗證從microarray芯片中篩選出來的明顯差異表達的miRNAs。
　　5.①通過miRanda在線數(shù)據(jù)庫預測和篩選A549細胞中明顯差異表達的miR

3、NA下游可能的靶基因。
　?、赪estern-blot法檢測其下游靶基因蛋白的表達量；流式細胞儀法檢測A549細胞中明顯差異表達的miRNA調(diào)控的細胞凋亡。
　?、哿魇郊毎麅x法檢測A549/DDP細胞中明顯差異表達的miRNA調(diào)控的細胞凋亡；MTT法檢測A549/DDP細胞存活率。
　　結(jié)果：
　　1.microarray芯片技術(shù)結(jié)果顯示：與DMSO對照組相比，姜黃素處理后，A549和A549/DDP細胞中mir

4、-186*的表達都明顯下調(diào)。
　　2.實時定量PCR驗證了microarray芯片檢測的上述結(jié)果。
　　3.①通過miRanda數(shù)據(jù)庫預測到的mir-186*下游的靶基因共有700多個，經(jīng)過對基因功能進行分類后，選定與凋亡相關(guān)的基因caspase10作為mir-186*下游的可能靶基因。
　?、谂c對照組相比，姜黃素處理后mir-186*的表達明顯下調(diào)，提高了其下游靶基因caspase10的表達水平，并且加速A549細胞

5、的凋亡；反之，轉(zhuǎn)染mir-186*precursors和precursor controls后，與precursor controls相比，mir-186*的表達明顯上調(diào)，降低了其下游基因caspase10的表達水平，并且減少A549細胞的凋亡。
　?、叟c對照組相比，姜黃素處理后mir-186*的表達明顯下調(diào)，加速A549/DDP細胞的凋亡，細胞存活率下降；轉(zhuǎn)染mir-186*的precursors和precursor contr

6、ols后，與precursor controls相比，mir-186*的表達上調(diào)，減少A549/DDP細胞的凋亡，細胞存活率增加。
　　結(jié)論：
　　1.caspase10是mir-186*下游靶基因之一。
　　2.姜黃素可通過調(diào)控mir-186*的表達，進而調(diào)控mir-186*下游靶基因caspase10的表達。
　　3.調(diào)控mir-186*的表達很可能是姜黃素促進肺腺癌細胞A549和A549/DDP凋亡的重要機