奈達(dá)鉑、藤黃酸對A549-DDP細(xì)胞的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　本課題通過體外實(shí)驗(yàn)探討奈達(dá)鉑(NDP)、藤黃酸(GA)對順鉑(DDP)耐藥非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549/DDP)作用及其機(jī)制，旨在為篩選有效抗腫瘤藥物和制定更加有效的順鉑耐藥非小細(xì)胞肺癌治療方案提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　1.應(yīng)用MTT方法研究DDP、NDP、GA單藥以及DDP聯(lián)合GA對A549/DDP細(xì)胞的生長抑制情況。
　　2.應(yīng)用等輻射分析方法進(jìn)行DDP和GA聯(lián)合作用與DDP、GA單藥作用的

2、差異分析比較。
　　3.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測各單藥或組合對A549/DDP細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期的影響。
　　4.應(yīng)用細(xì)胞免疫組織化學(xué)法定性及定位檢測DDP、NDP、GA單藥以及DDP聯(lián)合GA處理A549/DDP后的P-gp、P53、Bcl-2及Bax的表達(dá)。
　　5.應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法定量檢測DDP、NDP、GA單藥以及DDP聯(lián)合GA處理A549/DDP后的P-gp、P53、Bcl-2及Bax的表達(dá)
　　結(jié)果:

3、　　1.在A549/DDP和A549細(xì)胞中，DDP的IC50(23.36±1.41μg/ml、2.53±0.12μg/ml)具有明顯差異(P＜0.001)，顯示A549/DDP細(xì)胞的耐DDP的特性。
　　2.在A549/DDP細(xì)胞中， NDP的 IC50(19.97±0.88μg/ml)與 DDP的IC50(23.36±1.41μg/ml)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.024)。NDP作用使A549/DDP細(xì)胞產(chǎn)生明顯G2期阻滯(P=0

4、.005);也較DDP顯著促進(jìn)A549/DDP細(xì)胞早期及晚期凋亡(P=0.010、P=0.005)。
　　3.根據(jù)等輻射分析法，較低濃度DDP聯(lián)合GA即可對A549/DDP細(xì)胞增殖產(chǎn)生50％抑制率（8.47±0.94:0.4μg/ml和4.58±0.95:0.8μg/ml）。DDP聯(lián)合GA作用較DDP、GA單藥亦可明顯誘導(dǎo)A549/DDP細(xì)胞產(chǎn)生G2期阻滯(P=0.02、P=0.012);亦可明顯提高A549/DDP細(xì)胞早期及晚期

5、凋亡率(P=0.015，P=0.015;P=0.005，P=0.010)。
　　4.NDP作用下的A549/DDP細(xì)胞P-gP、P53及Bcl-2表達(dá)較DDP作用明顯降低(P=0.014;P=0.020;P=0.008)，而Bax表達(dá)顯著增加(P=0.024)，其中以Bcl-2表達(dá)降低最顯著(P=0.020); DDP聯(lián)合GA作用下的A549/DDP細(xì)胞P-gP、P53及Bcl-2表達(dá)較DDP、GA單藥作用明顯降低(P=0.006

6、，P=0.017;P＜0.01，P=0.001;P=0.007，P=0.004)，Bax表達(dá)增加(P=0.006，P=0.007)，其中以P53表達(dá)降低最顯著(P＜0.01，P=0.001)。
　　5.ERCC1在A549及A549/DDP細(xì)胞中均有表達(dá)，且表達(dá)無明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1、NDP對A549/DDP細(xì)胞有明顯的抑制細(xì)胞生長、阻滯細(xì)胞周期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。
　　2、較低濃度的DDP聯(lián)合GA即

7、可對A549/DDP細(xì)胞產(chǎn)生明顯的抑制生長、細(xì)胞周期阻滯及誘導(dǎo)凋亡作用，兩者具有協(xié)同抗腫瘤作用。
　　3、NDP及GA聯(lián)合DDP可能通過抑制P-gP表達(dá)、調(diào)節(jié)Bcl-2及Bax表達(dá)以及可能下調(diào)突變型P53表達(dá)，以減弱腫瘤細(xì)胞泵出抗癌藥物及DNA修復(fù)能力，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞促凋亡作用，達(dá)到拮抗A549/DDP的目的。其中NDP以下調(diào)Bcl-2的表達(dá)為主，而DDP聯(lián)合GA則以下調(diào)突變型P53的表達(dá)更明顯。
　　4、目前免疫組織化學(xué)法檢