β-谷甾醇對(duì)Hela和耐藥Hela-DDP細(xì)胞中miRNAs及靶基因的影響.pdf

1、天然產(chǎn)物β-谷甾醇是植物固醇的一種,其毒副作用小、安全性高、資源豐富,并且具有抗癌作用,已廣泛受到人們的關(guān)注。研究其可能的抑癌機(jī)理從而將其更好地應(yīng)用到腫瘤預(yù)防和治療中已成為當(dāng)前的首要任務(wù)。MicroRNAs在腫瘤研究中意義重大,通過控制其表達(dá)進(jìn)而抑制腫瘤的發(fā)生已成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。本文通過β-谷甾醇處理Hela細(xì)胞和Hela耐藥細(xì)胞(Hela/DDP),分析miRNAs和其靶基因的差異表達(dá),進(jìn)而預(yù)測(cè)可能的抑癌路徑,尋找癌癥治療前期可能的

2、分子標(biāo)記,及后期藥物篩選的依據(jù),這對(duì)宮頸癌的治療具有重大意義。
　　本研究使用不同濃度(50μmol/L、37.5μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L、6.25μmol/L)的天然產(chǎn)物β-谷甾醇處理Hela細(xì)胞和Hela/DDP細(xì)胞24h,證實(shí)β-谷甾醇對(duì)兩種細(xì)胞都存在抑制作用,并且發(fā)現(xiàn)藥物對(duì)Hela細(xì)胞的抑制作用要大于對(duì)Hela/DDP細(xì)胞的抑制作用。
　　利用microRNAs基因芯片技術(shù)和生物信息學(xué)工具

3、對(duì)β-谷甾醇處理24h的兩種細(xì)胞中744個(gè)miRNAs進(jìn)行高通量篩選及靶標(biāo)預(yù)測(cè),認(rèn)為hsa-miR-21、hsa-miR-143、hsa-miR-504、hsa-miR-10b可能與癌癥發(fā)生相關(guān),并通過TargetScan數(shù)據(jù)庫(kù)及最小自由能分析推測(cè)出,PDCD4可能是hsa-miR-21的靶標(biāo),RAC3和TP53可能是hsa-miR-504的靶標(biāo),TP53是hsa-miR-143的靶標(biāo)。TIAM1可能是hsa-miR-10b的靶標(biāo)。

4、r>　　用濃度為25μmol/L的β-谷甾醇處理兩種細(xì)胞,并以3h、6h、12h、18h、24h作為時(shí)間節(jié)點(diǎn),通過熒光定量PCR的方法對(duì)兩種細(xì)胞中藥物處理不同時(shí)間的microRNAs和其靶基因進(jìn)行定量分析。結(jié)果顯示:(1)在Hela細(xì)胞中β-谷甾醇藥物處理使得Hsa-miR-21被下調(diào),Hsa-miR-504、Hsa-miR-10b被上調(diào),Hsa-miR-143先上調(diào)后下調(diào);并且使得其靶基因TP53、PDCD4被上調(diào),RAC3被下調(diào),J