簡介：人輪狀病毒HUMANROTAVIRUSHRV是世界范圍內(nèi)引起5歲以內(nèi)嬰幼兒嚴(yán)重腹瀉最主要的病原體HRV感染是造成嬰幼兒腹瀉死亡的主要原因。HRV感染的發(fā)病率在發(fā)達(dá)國家和發(fā)展中國家間無明顯差異水質(zhì)和衛(wèi)生條件的改善并不能明顯降低輪狀病毒感染的發(fā)病率因此輪狀病毒感染已經(jīng)成為嚴(yán)重的全球公共衛(wèi)生問題給世界各國帶來沉重的疾病負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。目前尚無治療HRV感染的特效藥物研制疫苗是預(yù)防和控制HRV感染的唯一有效途徑。世界衛(wèi)生組織WLDHEALTHGANIZATIONWHO正積極推動(dòng)不同形式輪狀病毒疫苗的研究與開發(fā)。滅活全病毒疫苗是HRV疫苗開發(fā)潛在的一種策略。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明滅活的輪狀病毒可以產(chǎn)生好的免疫效果這為HRV滅活疫苗的開發(fā)提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。當(dāng)前國內(nèi)外均未見有HRV滅活疫苗進(jìn)入臨床研究或上市銷售。本研究開展了HRV滅活疫苗的研發(fā)工作包括HRV滅活疫苗的制備；HRV滅活疫苗在小鼠的免疫保護(hù)效果評價(jià)；同時(shí)還開展了HRV滅活疫苗參與的聯(lián)合疫苗的免疫效果的初步評價(jià)的研究。首先滅活P8G1和P2G3輪狀病毒的制備。規(guī)?；囵B(yǎng)的P8G1或P2G3輪狀病毒收獲液經(jīng)離心、微濾、超濾和層析等步驟純化病毒液中95％以上的蛋白質(zhì)被去除SDSPAGE和WESTERNBLOT分析證明純化病毒液含有輪狀病毒特異的蛋白未見其它蛋白條帶。05ML純化病毒液中VERO細(xì)胞DNA的殘余量為100PG～500PG之間。純化的病毒結(jié)構(gòu)完整呈典型的輪狀病毒特征具有感染性基因組未發(fā)生突變。純化病毒液中加入終濃度000925％甲醛先在56℃加熱30MIN然后在37℃持續(xù)孵育至72H病毒被完全滅活。滅活的病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)保持完整具有免疫原性。隨后將滅活的P8G1輪狀病毒與氫氧化鋁佐劑吸附經(jīng)后肢肌肉注射途徑免疫小鼠評價(jià)HRV滅活疫苗在小鼠的免疫效果和保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HRV滅活疫苗可以誘發(fā)血清IGG和IGA腸道IGG和IGA及中和抗體等全身和局部體液免疫反應(yīng)同時(shí)也引起效應(yīng)TH1和TH2CD4T淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)。其中中和抗體在體外的中和實(shí)驗(yàn)中可以中和同型感染性WA株G1型輪狀病毒和異型感染性SA11株G3型輪狀病毒顯示一定的交叉保護(hù)作用。在小鼠主動(dòng)和被動(dòng)攻擊保護(hù)實(shí)驗(yàn)證明HRV滅活疫苗可有效保護(hù)小鼠免受感染性SA11輪狀病毒的攻擊。最后在小鼠模型進(jìn)行了HRV滅活疫苗參與的聯(lián)合疫苗的免疫效果評價(jià)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)不同血清型的二價(jià)輪狀病毒滅活疫苗在抗原量相同時(shí)與單價(jià)疫苗的免疫效果無顯著差別。在與甲型肝炎滅活疫苗INACTIVATEDHEPATITISAVACCINEIHAV聯(lián)合免疫時(shí)發(fā)現(xiàn)聯(lián)合疫苗中IHAV的免疫效果不及單價(jià)IHAV理想；而HRV滅活疫苗免疫效果沒有受到影響。在與脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗INACTIVATEDPOLIOVIRUSVACCINEIPV聯(lián)合免疫中發(fā)現(xiàn)聯(lián)合疫苗中的HRV滅活疫苗誘發(fā)IGG水平高于單價(jià)疫苗IGG水平；Ⅰ型和Ⅲ型IPV誘導(dǎo)的中和抗體水平高于單獨(dú)使用的IPV誘導(dǎo)的中和抗體水平而Ⅱ型IPV誘導(dǎo)的中和抗體水平卻不及單獨(dú)使用的Ⅱ型IPV誘導(dǎo)的中和抗體水平。本研究初步建立了HRV滅活疫苗純化和滅活的工藝并對輪狀病毒滅活疫苗的免疫效果和保護(hù)作用進(jìn)行了評價(jià)為HRV滅活疫苗開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和臨床前數(shù)據(jù)。同時(shí)對輪狀病毒參與的聯(lián)合疫苗的免疫效果進(jìn)行了評價(jià)為輪狀病毒滅活疫苗的應(yīng)用和聯(lián)合疫苗的開發(fā)做了有益的探索。

簡介：點(diǎn)擊查看更多腸道病毒68型血清流行病學(xué)調(diào)查及A組腸道病毒重組分析.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文五種蟲媒病毒的傳代和鑒定以及生物學(xué)性狀和分子生物學(xué)特征的研究姓名彭文明申請學(xué)位級別碩士專業(yè)微生物學(xué)指導(dǎo)教師黃如統(tǒng)200261五種蟲媒病毒的傳代鑒定及生物學(xué)與分子生物學(xué)性狀的研究中文摘要清組。誣種蟲媒病毒的生物學(xué)實(shí)驗(yàn)顯示，1～3日齡乳鼠對這五種蟲媒病毒均敏感，但發(fā)病時(shí)間及癥狀有所不同。MAY發(fā)病時(shí)間約為1～2D，SFVLD，MVE3D，ILH2D，BUN1～2D．在細(xì)胞敏感性試驗(yàn)中，采用微量細(xì)胞培養(yǎng)方法測定病毒的滴度，將不同稀釋度的鼠腦懸液分別接種于LLCMK、BHKZ、C6／36和，．，細(xì)胞，從五種病毒在這4株傳代細(xì)胞上出現(xiàn)CPE的時(shí)間來看，以在BHK。細(xì)胞上出現(xiàn)的最早、一般為23天；CPE最明顯，MAY和SFV為融合CPE，而且滴度普遍較高，都在6．5以上．空斑試驗(yàn)對細(xì)胞的要求較高，為了探索細(xì)胞培養(yǎng)的最佳條件，選擇血清含量、PH值和卡那霉素濃度三個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的主要影響因素，按照L，33正交設(shè)計(jì)對BHK，細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行三因素三水平試驗(yàn)。結(jié)果表明，在60％DMEM，30％的0．5％水解乳蛋白，10％小牛血清，常量青、鏈霉素和50¨G／ML卡那霉素，保持PH7．2條件下，BHK，細(xì)胞生長最好，細(xì)胞單層能夠維持7天以上．在該培養(yǎng)條件下，五種病毒在BHK，。細(xì)胞單層上于不同時(shí)間出現(xiàn)了形態(tài)、大小都不相同的空斑，最早出現(xiàn)空斑的時(shí)間為23天，最佳時(shí)間為3～4天．其中SFV出現(xiàn)了圓形直徑4．7MM的大空斑，MAY、ILH和BUN出現(xiàn)1．0～1．6MM的空斑，而MVE僅為0．7MM的小空斑．隨后進(jìn)行了病毒的血凝試驗(yàn)，五種蟲媒病毒對鵝紅細(xì)胞的血凝最適PH值分別為MAY6．4、SFV6．4、MVE7．0、ILH6．6和BUN6．4。以上性狀均符合蟲媒病毒的生物學(xué)性質(zhì)．在生物學(xué)性狀研究的基礎(chǔ)上，本文又從分子生物學(xué)水平對這五種蟲媒病毒進(jìn)行了進(jìn)一步的研究．首先從乳鼠腦中提取病毒基因組RNA，利用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)RTPCR技術(shù)進(jìn)行五種蟲煤病毒部分結(jié)構(gòu)區(qū)或非結(jié)構(gòu)區(qū)中保守基因片段的CDNA擴(kuò)增，獲得的目的片段分別克隆于PGEMTEASY載體，挑陽性克隆測序，并與已知的序列進(jìn)行同源性比較．測定的五種蟲媒病毒核苷酸序列在GENBANK中檢索，發(fā)瑰測得病毒的核苷酸序列與已知相應(yīng)病毒的序列同源性最高，MAY與基因庫中AFL26875序列3～371BP的同源性為97％，SFV與AJ251359序列47965337BP的同源性軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院磺士論文第2頁

簡介：點(diǎn)擊查看更多人偏肺病毒感染分子流行病學(xué)及與哮喘發(fā)作的關(guān)系.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點(diǎn)擊查看更多諾瓦克樣病毒血清流行病學(xué)及基因型別分析研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：●博士學(xué)位論文SHANDONGUNIVERSITYDOCTORAIDISSORTATION論文題目三叉神經(jīng)痛合并根區(qū)蛛網(wǎng)膜粘連的病毒病因?qū)W研究THEVIRALETIOLOGYRESEARCHOFTRIGEMINALL‘●OO1●1一ONEURALGIAC0MBLNENARACIINOLDS7AICINESLONS作專導(dǎo)合作導(dǎo)師2011年5月22日本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名ET期趁生鄉(xiāng)沙關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解山東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定論文作者簽名師簽名

簡介：研究背景1965年，美國科學(xué)家BLUMBERG首次在澳大利亞土著人血清中發(fā)現(xiàn)“澳大利亞抗原”。其隨后被確定為乙型肝炎表面抗原HEPATITISBSURFACEANTIGEN，HBSAG，是乙肝病毒HEPATITISBVIRUS，HBV感染后最早出現(xiàn)于患者血清中的HBV標(biāo)志物。若HBSAG在患者血清中持續(xù)時(shí)間超過6個(gè)月，即可診斷為慢性乙型肝炎病毒感染CHRONICHEPATITISB，CHB。據(jù)世界衛(wèi)生組織WHO報(bào)道，全世界有35億左右慢性HBV感染者，每年大約有100萬人因HBV感染引起的并發(fā)癥而死亡。如肝硬化CIRROSIS、肝衰竭LIVERFALIURE和原發(fā)性肝細(xì)胞癌HEPATOCELLULARCARCINOMAHCC。因此，慢性乙型肝炎患者的管理與治療是個(gè)艱巨而意義重大的任務(wù)。乙肝病毒E抗原HEPATITISBEANTIGEN，HBEAG與HBSAG同時(shí)或稍晚出現(xiàn)于感染者血清中，是乙肝病毒在體內(nèi)復(fù)制活躍的標(biāo)志之一。在慢乙肝患者管理與治療過程中，若出現(xiàn)HBSAG或HBEAG消失，并產(chǎn)生表面抗體HEPATITISBSURFACEANTIBODYHBSAB或E抗體HEPATITISBEANTIBODYHBEAB，即發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換SEROCONVERSION。通常意味著體內(nèi)乙肝病毒復(fù)制活性降低，病情好轉(zhuǎn)，是常用的評估病情和治療效果的指標(biāo)，是重要的臨床治療終點(diǎn)。越來越多的臨床研究發(fā)現(xiàn)，治療前血清HBSAG和HBEAG低水平與其高血清學(xué)轉(zhuǎn)換率密切相關(guān)。隨著檢測技術(shù)的發(fā)展，定量檢測HBSAG和HBEAG水平已成為可能。這為我們深入探討HBSAG和HBEAG水平及其變化模式評估HBV抗病毒療效提供了新手段。因此，我們需要能準(zhǔn)確定量血清HBSAG和HBEAG水平的檢測方法。目前，有兩種試劑可以定量檢測血清HBSAG水平，分別是美國雅培公司和德國羅氏公司的HBSAG檢測方法。其中最為廣泛使用的是雅培表面抗原檢測方法。而羅氏表面抗原檢測方法可以通過簡單的稀釋步驟和轉(zhuǎn)換實(shí)現(xiàn)HBSAG定量檢測。KARSTENWURSTHN和MILANJSONNEVELD等研究團(tuán)隊(duì)已經(jīng)對兩種檢測方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)二者之間的結(jié)果具有很高的相關(guān)性。但是其研究病例基因型分布以A型和D型為主，而我國分布主要是C型和B型，故本研究第一部分比較雅培和羅氏HBSAG檢測方法定量檢測基因型B和C患者血清HBSAG水平的相關(guān)性和差異性。目前國際上尚無HBEAG定量檢測試劑，但是雅培和羅氏HBEAG檢測方法都可以通過PEIU標(biāo)準(zhǔn)品，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后實(shí)現(xiàn)定量檢測血清HBEAG水平。雅培E抗原試劑每次更換批號時(shí)，需要重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線而羅氏HBEAG試劑可以直接使用由公司提供的定量轉(zhuǎn)換公式，不受試劑批號影響。第二部分主要比較雅培和羅氏HBEAG檢測方法定量檢測結(jié)果的一致性。乙肝病毒C基因區(qū)高度易變，常見變異位點(diǎn)G1896A變異和A1762TG1764A雙變異。前者可使HBEAG翻譯提前終止，而A1762TG1764A雙變異可明顯降低血清HBEAG水平。而血清HBEAG低水平者易于發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換。但是臨床實(shí)踐中，我們亦觀察到部分病例持續(xù)維持低水平E抗原，而不發(fā)生E抗原血清學(xué)轉(zhuǎn)換。我們推測，是否造成HBEAG定量降低的原因的差異，導(dǎo)致其結(jié)果的不同。因此，第三部分研究主要著重結(jié)合BCPPC變異，觀察E抗原定量水平對血清學(xué)轉(zhuǎn)換發(fā)生率的影響，從而提高HBEAG定量水平對抗病毒治療療效的評估預(yù)測能力。研究目的1結(jié)合基因型及抗病毒治療狀態(tài)，比較羅氏與雅培試劑定量檢測乙肝E抗原陽性患者血清HBSAG和HBEAG水平的相關(guān)性與差異性。2結(jié)合BCPPC變異，觀察血清HBEAG定量水平對HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換發(fā)生率的影響，從而提高HBEAG定量水平對抗病毒治療療效的評估預(yù)測能力。研究方法1比較雅培和羅氏試劑檢測血清HBSAG和HBEAG水平的相關(guān)性與差異性11、研究樣本來源共收集1308例乙肝患者病例血清，均來自廣州市南方醫(yī)院肝病中心。所有血清均同時(shí)接受雅培和羅氏兩種表面抗原和E抗原方法檢測，其中16份血清未納入定量分析比較，因兩種或一種方法檢測其E抗原為陰性。所有血清檢測前均被分裝為成兩份，保存于30℃冰箱。12、雅培和羅氏檢驗(yàn)方法121、HBSAG檢測方法雅培HBSAG方法是化學(xué)發(fā)光微粒法，羅氏方法是電子化學(xué)發(fā)光微粒法。前者是直接定量檢測方法，而羅氏HBSAG方法需要通過簡單的稀釋步驟和轉(zhuǎn)換實(shí)現(xiàn)定量檢測血清HBSAG水平。122、HBEAG檢測方法雅培和羅氏HBEAG方法都是定性檢測方法，但是通過PEIU標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線來定量檢測血清HBEAG水平。13、基因型測定對與乙肝病毒聚合酶逆轉(zhuǎn)錄區(qū)BC亞區(qū)部分重疊的表面抗原編碼區(qū)進(jìn)行直接測序，然后進(jìn)行系統(tǒng)樹構(gòu)建分型。14、統(tǒng)計(jì)分析所有結(jié)果在分析前均取10為底的對數(shù)值，兩種方法的相關(guān)性比較使用SPSS180統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行PEARSON相關(guān)分析連續(xù)變量的分組比較采用非參數(shù)方法MANNWHITNEY兩種方法差異性分析采用GRAPHPADPRISM50軟件BLALTMANPLOT進(jìn)行描述。所有分析均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，若P＜005，則認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2HBEAG定量與BCPPC變異及其血清學(xué)轉(zhuǎn)換關(guān)系研究21、病例來源患者來自南方醫(yī)院肝病中心參加“國家十一五重大專項(xiàng)”EFFT臨床研究的受試者共83例。22、基因變異分析用DNA抽提試劑盒QIAAMPDNABLOODMINIKIT提取血清HBVDNA，巢氏PCR擴(kuò)增C基因區(qū)并將第二輪產(chǎn)物送英駿公司進(jìn)行直接測序。序列峰圖用CHROMAS軟件分析，變異判斷用MUTATIONSURVEY軟件30分析。23、統(tǒng)計(jì)分析所有數(shù)據(jù)均使用SPSS180統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。分組間比較采用非參數(shù)MANNWHITUEY方法分析，多組間比較采用KRUSKALWALLISH檢驗(yàn)，率的比較用FISHER精確檢驗(yàn)分析，所有結(jié)果均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，P＜005被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HBVDNA和HBEAG在分析前取10為底的對數(shù)值。研究結(jié)果1比較雅培和羅氏試劑檢測血清HBSAG和HBEAG水平的相關(guān)性與差異性11、基因型分布與治療狀態(tài)根據(jù)直接測序及種系發(fā)生分析，血清總體基因型分布為B基因型組514例3978％C基因型組776例6006％，D基因型2例016％。核苷初治組基因型分布為B基因型442例3946％C基因型676例6036％，D基因型2例018％。根據(jù)治療狀態(tài)，分別有11208669％份未治療患者血清納入初治組，1721331％血清納入治療組。12、治療前血清HBSAG和HBEAG水平與基因分布關(guān)系治療前表面抗原分布因基因型不同而有顯著差異，基因型B組表面抗原定量高于基因型C組中位數(shù)B∶C453VS408LOG10IUML，P0000，Z10845治療前樣本不同基因型E抗原定量的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義中位數(shù)B∶C296VS288LOG10PEIUMLP0203Z1274。13、系統(tǒng)性比較雅培和羅氏HBSAG方法系統(tǒng)性比較，其相關(guān)系數(shù)是093995％CI0932～0945，P0000。而其差異性為LOG10IUML羅氏LOG10IUML雅培0075±0241LOG10IUML。而兩種檢測方法定量檢測HBEAG水平系統(tǒng)性比較，其相關(guān)系數(shù)是098795％CI0985～0988，P0000。而其差異性為LOG10PEIUML羅氏LOG10PEIUML雅培）0149±0165LOG10PEIUML。14、基因型分組比較根據(jù)基因型分成基因型B組和C組，兩種HBSAG檢測方法相關(guān)系數(shù)分別為094295％CI0932～0951和094895％CI0940～0955，P0000。而其差異性（比率（羅氏雅培））分別為0993和1037。兩種HBEAG檢測方法其相關(guān)系數(shù)分別為098895％CI0985～0990和098695％CI0984～0988，P0000。而其差異性（比率（羅氏雅培））分別為0815和0957。15、治療狀態(tài)分組比較根據(jù)治療狀態(tài)，各基因型組分別被分為兩組，B基因型組治療前HBSAG相關(guān)性為091995％CI0903～0932，治療后相關(guān)性為097995％CI0967～0987，P0000。而C基因型組治療前HBSAG相關(guān)性為094595％CI0936～0952治療后相關(guān)性095695％CI0935～0970，P0000。B基因型組治療前HBEAG相關(guān)性為098595％CI0981～0987治療后HBEAG相關(guān)性為098095％CI0968～0988，P0000。而C基因型組治療前HBEAG相關(guān)性為098495％CI0981～0986治療后HBEAG相關(guān)性098295％CI0973～0988P0000。2HBEAG定量與BCPPC變異及其血清學(xué)轉(zhuǎn)換關(guān)系研究21、治療52周累積HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換率與基線期HBEAG定量關(guān)系根據(jù)HBEAG水平是否大于244LOG10PEIUML，分為HBEAG低定量組和HBEAG高定量組，其隨訪12周、24周、36周、52周時(shí)HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換率為2353％VS0％P00033529％VS192％P00014118％VS577％P00015294％VS1731％P0009。22、BCPPC變異與基線期E抗原定量關(guān)系研究變異組與野生株組E抗原定量水平有區(qū)別，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義中位數(shù)變異組野生組269VS312LOG10PEIUML，P0032以HBVDNA校正后，同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0003。1762A1764T純合變異者E抗原定量中位數(shù)為211LOG10PEIUML，雜合變異者E抗原定量中位數(shù)為310LOG10PEIUML，野生株E抗原定量中位數(shù)為308LOG10PEIUML，三組之間E抗原定量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差別P0002。而雜合變異組與野生組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0693。以HBVDNA水平作為校正因素，比較三組間區(qū)別，同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0006，而雜合變異組與野生組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P0973。23、BCPPC變異與治療各期E抗原血清學(xué)轉(zhuǎn)換率關(guān)系研究變異組與野生組隨訪12周、24周、36周、52周時(shí)HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換率為95％VS00％P015095％VS111％P10095％VS222％P0173238％VS296％P0589。研究結(jié)論1雅培與羅氏HBSAG方法和HBEAG方法定量檢測結(jié)果均具有較高的相關(guān)性和低差異性，且不受治療狀態(tài)和基因型影響。兩種檢測方法均可用于臨床與科研定量檢測HBSAG和HBEAG水平。2G1896A和或A1762TG1764A變異可明顯降低血清HBEAG水平。3血清HBEAG低定量水平時(shí)，發(fā)生HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換的概率更高。4治療前G1896A和或A1762TG1764A變異與否與HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換率無明顯相關(guān)性。

簡介：背景慢性乙型肝炎是一種在世界范圍內(nèi)廣泛分布的傳染性疾病，由于慢性乙型肝炎的流行范圍廣，治療費(fèi)用高，對衛(wèi)生服務(wù)保障體系造成巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，慢性乙型肝炎已成為我國重要的公共衛(wèi)生問題之一。目的以拉米夫定，一天一次的口服抗病毒藥物為例，對慢性乙型肝炎抗病毒治療進(jìn)行成本效果評價(jià)，比較長期的抗病毒治療與非抗病毒治療以及不同療程抗病毒治療的成本效果。方法在拉米夫定臨床試驗(yàn)和相關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上采用MARKOV模型對抗病毒治療和常規(guī)非抗病毒治療慢性乙型肝炎的成本和臨床效果進(jìn)行估計(jì)。通過拉米夫定中國Ⅲ期臨床試驗(yàn)，文獻(xiàn)回顧和專家咨詢等方法獲得MARKOV模型各個(gè)狀態(tài)間的轉(zhuǎn)換概率以及各個(gè)狀態(tài)下的直接醫(yī)療成本。對長期治療的成本以每年5％的比例進(jìn)行了貼現(xiàn)。結(jié)果長遠(yuǎn)來看，與非抗病毒治療相比，不同療程的拉米夫定治療每延長1年壽命所需的醫(yī)療費(fèi)用增量成本效果在25000元以下，范圍在2700～24139元之間。療程較長的拉米夫定治療與療程較短者相比，每延長1年壽命所需的醫(yī)療費(fèi)用在38500元以下。4年拉米夫定治療可延長慢性乙型肝炎患者的壽命，而且每年所需的醫(yī)療費(fèi)用低于25000元。比較上海地區(qū)2003年的人均GDP，以拉米夫定為治療藥物的長期抗病毒治療每延長1年壽命所需的醫(yī)療費(fèi)用是具有成本效益。結(jié)論抗病毒治療比非抗病毒治療更具成本效果，而且治療療程越長，成本效果越好；隨著今后療效更好的藥物的出現(xiàn)和藥費(fèi)的下降，對慢性乙型肝炎患者實(shí)施抗病毒治療將更具成本效果。

簡介：目的聯(lián)合抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療COMBINEDANTIRETROVIRALTHERAPY，CART問世于上世紀(jì)90年代中期，能最大程度、最持久地減少個(gè)體血漿病毒載量VIRALLOAD，VL，抑制HIV病毒的復(fù)制，重建機(jī)體免疫，改善疾病進(jìn)展。本研究旨在于前瞻性隊(duì)列中評價(jià)以國產(chǎn)仿制藥為主的一線CART方案的病毒學(xué)及免疫學(xué)療效，以期為二線治療需求提供參考；進(jìn)一步探究治療效果的影響因素，從而對相關(guān)因素進(jìn)行干預(yù)和控制，對于延長抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物的使用周期、提高CART治療的成功率均具有重要意義。方法研究對象為我國“十一五”HIVAIDS抗病毒治療隊(duì)列一（即初治患者），入選標(biāo)準(zhǔn)1）年齡1865歲；2）ELISA檢測HIV1抗體陽性并通過WESTERNBLOT法確認(rèn)；3）在入組前30天內(nèi)CD4T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)小于350CELLSUL4）受試者在此之前沒有接受過任何抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療。治療方案為以D4TAZT3TCNVP為主。研究終點(diǎn)定義為1）啟動(dòng)CART開始至第一次檢測到患者血漿VL＜40COPIESML為止，進(jìn)一步分析影響VL下降至TND概率（第一次達(dá)到病毒學(xué)完全抑制所需時(shí)間）的因素。2）持續(xù)治療的第48周，測定患者血漿VL水平，定義VL＜40COPIESML或達(dá)到TND為病毒學(xué)完全抑制VIROLOGICSUPPRESSION，VL≥40COPIESML為病毒學(xué)未完全抑制，進(jìn)一步分析影響病毒學(xué)抑制效果的因素。3）持續(xù)治療的第48周，測定患者CD4T淋巴細(xì)胞水平，按其較基線時(shí)增長的數(shù)值將患者分為免疫學(xué)完全應(yīng)答組≥100CELLSUL、免疫學(xué)未完全應(yīng)答組＜100CELLSUL，進(jìn)一步分析影響免疫學(xué)應(yīng)答反應(yīng)的因素。對可能影響各個(gè)研究終點(diǎn)的自變量采用COX比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型、LOGISTIC回歸模型進(jìn)行單因子篩選和多因素建模分析。結(jié)果1本研究CART治療后1年整個(gè)隊(duì)列病毒抑制率達(dá)到了788％（按VL＜40COPIESML計(jì)算）或938（按VL＜400COPIESML計(jì)算），達(dá)到免疫學(xué)完全應(yīng)答的患者占630，免疫學(xué)未完全應(yīng)答的患者占270。整個(gè)隊(duì)列48周CART后CD4T細(xì)胞平均增加1398CELLSUL。2男性患者啟動(dòng)CART后達(dá)到完全病毒抑制的概率較女性低（男性相對于女性RH08395CI078089P004），而且在48周CART后，男性出現(xiàn)病毒未完全抑制的概率更高男性相對于女性31495CI，140704P001。3基線患者的血漿VL水平（每增加1LGCOPIESMLRH06795CI，059076P＜001）對患者啟動(dòng)CART后達(dá)到完全病毒抑制的概率有影響，尤其是基線血漿VL＞10000COPIESML的患者（＞10000COPIESML相對于VL＜400COPIESMLRH03795CI01509P003）。HIVAIDS患者在治療期間VL下降至TND所需時(shí)間與在CART的48周能否達(dá)到病毒學(xué)完全抑制有顯著關(guān)系每增加1周106；95CI104107P＜001。4既往有機(jī)會性感染（29195CI，147573P＜001）、對所用方案耐藥42495CI，1551161P＜001對HIVAIDS患者治療1年能否達(dá)到病毒學(xué)完全抑制有顯著影響。5持續(xù)使用含AZT的B方案組（相對于維持A方案組20495CI，107389P003）發(fā)生不完全免疫應(yīng)答的概率更大。而在治療過程中將AZT更換為D4T的C方案組發(fā)生不完全免疫應(yīng)答的風(fēng)險(xiǎn)相對所有減少相對于維持A方案組19095CI，101360P005。結(jié)論本研究首次在中國前瞻性CART隊(duì)列（初治HIVAIDS患者）中進(jìn)行了病毒學(xué)和免疫學(xué)療效影響因素的分析。在保持較好的服藥依從性和發(fā)生毒副反應(yīng)或耐藥時(shí)能及時(shí)調(diào)整用藥的條件下，本隊(duì)列絕大部分接受CART的患者都顯示出了較好的病毒學(xué)抑制效果與免疫學(xué)應(yīng)答反應(yīng)。在CART啟動(dòng)的最初36個(gè)月是病毒學(xué)和免疫學(xué)治療效果最明顯的時(shí)期，以后變化逐步趨緩。在CART開始后的1年內(nèi)，女性患者相對于男性患者獲得的病毒學(xué)治療效果更佳，但在免疫學(xué)治療效果方面未發(fā)現(xiàn)顯著性別差異，具體機(jī)制可能和不同性別免疫功能、激素水平以及CART藥物代謝存在差異有關(guān)。相對于基線血漿VL的影響，使血漿VL在更短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到TND更有助于CART1年內(nèi)病毒學(xué)治療效果的維持。既往有機(jī)會性感染、對所用CART藥物產(chǎn)生耐藥是影響病毒學(xué)治療效果的主要因素。使用包含AZT的CART方案可能產(chǎn)生骨髓抑制而影響治療1年時(shí)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，與此同時(shí)，是否達(dá)到病毒學(xué)完全抑制與是否產(chǎn)生免疫學(xué)應(yīng)答無顯著關(guān)聯(lián)。

簡介：目的1、分離、培養(yǎng)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MMSCS，確保其良好的增殖能力和多向分化潛能，研究其生物學(xué)特征，并對相關(guān)生物學(xué)特性進(jìn)行初步研究，為其后應(yīng)用于動(dòng)物模型做準(zhǔn)備。2、制備RAAV1EGFP載體。觀察其感染染小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞MMSCS及對MMSCS生物學(xué)特性的影響，并證實(shí)該病毒載體可高效轉(zhuǎn)染MMSCS并獲得高效穩(wěn)定的體外表達(dá)，以符合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)要求方法1、沖洗小鼠長骨后，I型膠原酶消化長骨碎片，PBS洗凈骨片后完全培養(yǎng)基接種骨片。靜置3天，換液去除骨碎片及未貼壁細(xì)胞。后每3天換液。細(xì)胞融合度達(dá)70％80胰酶消化，按4103CM2密度接種培養(yǎng)。觀察MMSCS生長特點(diǎn)、表面特異性標(biāo)記、多向分化潛能的變化情況。2、采用PEI轉(zhuǎn)染法將三質(zhì)粒PTREGFP，PXR1，PXX680共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝RAAV1EGFP，通過氯化銫密度梯度離心純化獲得RAAV1EGFP通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測病毒滴度。3、采用不同滴度RAAV1EGFP感染MSCS，需找合適的感染復(fù)數(shù)。觀察轉(zhuǎn)染后MMSCS生長特點(diǎn)、表面特異性標(biāo)記、多向分化潛能的變化情況。觀察RAAV1EGFP轉(zhuǎn)染對于MMSCS生物學(xué)特性的影響。結(jié)果1、收集小鼠骨片培養(yǎng)，經(jīng)傳代培養(yǎng)3代以上后細(xì)胞呈現(xiàn)為均質(zhì)性較好的短梭形細(xì)胞。細(xì)胞匯合80?時(shí)G0G1期細(xì)胞百分率8377。P3P6代細(xì)胞表面抗原高表達(dá)CD29、CD44、SCA1，低表達(dá)CD45、CD31、CD34P4代細(xì)胞經(jīng)體外定向誘導(dǎo)培養(yǎng)，可分化為成骨及脂肪細(xì)胞，證實(shí)所培養(yǎng)細(xì)胞具備多向分化潛能。2、通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測，獲得高純度的滴度為141011VGML的RAAV1EGFP。3、RAAV1EGFP感染MMSCS最合適MOI值為105。流式細(xì)胞儀檢測RAAV1EGFP感染MMSCS48HGFP的表達(dá)率為975±05。RAAV1EGFP感染MMSCS后，MMSCS可正常貼壁，生長迅速，形態(tài)上無明顯改變，其細(xì)胞表面特異性標(biāo)記及多向分化潛能未受明顯影響。結(jié)論1、通過骨片法成功分離、培養(yǎng)了正常C57BL6小鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，生物學(xué)特性穩(wěn)定，可用于進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。2、成功構(gòu)建了重組腺相關(guān)病毒載體，并證實(shí)對其對MMSCS具有較高的轉(zhuǎn)染效率并獲得高效穩(wěn)定的體外表達(dá)，RAAV1轉(zhuǎn)染未明顯影響MMSCS的生物學(xué)特性。

簡介：目的了解南平市兒童乙型肝炎流行病學(xué)特征，分析兒童感染乙肝的危險(xiǎn)因素，掌握南平市乙肝病毒基因型的分布，探討各基因型與臨床的關(guān)系，為制定預(yù)防控制措施和臨床治療方案提供依據(jù)。方法采用多階段系統(tǒng)抽樣方法，選取15歲兒童開展問卷調(diào)查并采血檢測乙肝兩對半；采用12病例對照研究方法，分析兒童感染乙肝危險(xiǎn)因素；對我市乙型肝炎感染者應(yīng)用微板核酸雜交ELISA法進(jìn)行乙肝病毒基因分型，用多分類LOGISTIC回歸分析乙肝病毒基因型的臨床意義。結(jié)果1南平市兒童乙肝疫苗接種率為9093％，首針及時(shí)率為7922％。乙肝表面抗原HBSAG陽性率為367％，乙肝表面抗體HBSAB陽性率為6095％。城區(qū)兒童HBSAG陽性率為165％，HBSAB陽性率為6758％；農(nóng)村兒童HBSAG陽性率為493％，HBSAB陽性率為5680％。2對兒童感染乙肝危險(xiǎn)因素的分析表明家庭內(nèi)有乙肝病人或HBSAG攜帶者、有靜脈輸液史是感染乙肝病毒的危險(xiǎn)因素，而接種乙肝疫苗可有效阻斷乙肝病毒傳播，降低HBSAG攜帶率。3南平市乙肝病毒基因型以B型為主5049％，其次為C型3883％、BC及CD混合型631％、D型437％。未發(fā)現(xiàn)其它基因型。B基因型感染者的年齡明顯小于C基因型，B基因型感染者的HBEAG陽性率、HBVDNA含量明顯小于C基因型和混合型，B基因型是無癥狀乙肝攜帶者、急性肝炎患者、慢性肝炎患者的主要基因型，C基因型為乙肝后肝硬化患者的主要基因型。結(jié)論乙肝疫苗推廣應(yīng)用后，南平市兒童對乙肝病毒己建立起有效的免疫屏障，HBSAG陽性率較以往下降顯著，但應(yīng)加強(qiáng)農(nóng)村乙肝防制工作。家庭內(nèi)有乙肝病人或HBSAG攜帶者和醫(yī)源性傳播是當(dāng)前南平市兒童感染乙肝的主要危險(xiǎn)因素。南平市乙肝病毒基因型以B基因型為主，其次為C基因型。乙肝病毒C基因型復(fù)制能力高、傳染性強(qiáng)，與乙肝后肝硬化有關(guān)。進(jìn)一步提高新生兒乙肝疫苗接種率和首針及時(shí)率，切斷乙肝傳播途徑，仍然是南平市乙肝防制的重要措施。

簡介：目的構(gòu)建人結(jié)締組織生長因子CONNECTIVETISSUEGROWTHFACT，CTGF和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1TISSUEINHIBITOFMETAUOPROTEINASES1，TIMP1基因的腺相關(guān)病毒ADENOASSOCIATEDVIRUS，AAV雙表達(dá)重組質(zhì)粒PSNAVCTGFIRESTIMP1，體外檢測生物學(xué)活性后進(jìn)行病毒包裝，并評價(jià)CTGF和TIMP1基因逆轉(zhuǎn)人腰椎間盤退變的可行性。方法對構(gòu)建的重組質(zhì)粒PSNAVCTGFIRESTIMP1進(jìn)行PCR鑒定、酶切鑒定和測序，用脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染人胚腎293HEK293細(xì)胞，通過雙重免疫熒光、WESTERNBLOT、MTT法和ELISA等方法檢測細(xì)胞因子CTGF和TIMP1蛋白的生物學(xué)活性。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行病毒顆粒包裝。RAAVCTGFIRESTIMP1感染體外分離培養(yǎng)并鑒定的人退變腰椎間盤髓核細(xì)胞，通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察、氯胺T法、免疫組織化學(xué)法、S整合法以及ANTONOPOULOS法等檢測CTGF和TIMP1對于人退變腰椎間盤髓核細(xì)胞蛋白多糖和Ⅱ型膠原合成的影響。結(jié)果成功構(gòu)建了含有完全正確的CTGF和TIMP1基因序列的AAV重組質(zhì)粒。包裝出的具有生物學(xué)活性的RAAVCTGFIRESTIMP1病毒能夠感染人退變腰椎間盤髓核細(xì)胞。CTGF和TIMP1聯(lián)合可以促進(jìn)髓核細(xì)胞蛋白多糖和Ⅱ型膠原的合成。結(jié)論腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的CTGF和TIMP1可以通過促進(jìn)髓核細(xì)胞蛋白多糖和Ⅱ型膠原合成來延緩或逆轉(zhuǎn)腰椎間盤退變。

簡介：研究背景手足口病（HFOOTMOUTHDISEASEHFMD）是由人腸道病毒（HUMANENTEROVIRUSHEV）引起的常見兒童急性傳染病，以發(fā)熱和手、足、口腔和臀部等部位出現(xiàn)皮疹為主要臨床特征，少數(shù)病例出現(xiàn)腦炎、心肌炎、肺水腫、急性弛緩性麻痹等嚴(yán)重并發(fā)癥，極少數(shù)情況下可引起死亡。HFMD可由許多血清型的HEV引起，但最主要的病原體為人腸道病毒71型（HEV71）和柯薩奇病毒A組16型（CVA16）。自1981年HFMD在中國上海首次報(bào)道以來，全國各地均有HFMD暴發(fā)及散發(fā)的報(bào)道。內(nèi)蒙古自治區(qū)自2007年首次報(bào)道HFMD以來，疫情基本呈逐年遞增的趨勢，而且HFMD的重癥病例和死亡病例的發(fā)病率也呈逐年增加，截至2010年全年累計(jì)報(bào)告HFMD病例18944例，重癥病例247例，死亡13例。然而到目前為止，HFMD的致病機(jī)理還不確定，而且還沒有安全有效的疫苗和藥物用于預(yù)防和控制本病，因此加強(qiáng)該病的流行病學(xué)、病原學(xué)及基因特征和病理學(xué)研究具有非常重要的意義。為了更好的預(yù)防和控制HFMD，我們開展了相關(guān)內(nèi)容的基礎(chǔ)研究。研究目的為了了解內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行情況，了解HFMD主要致病病原體的流行本底，更好地預(yù)防和控制HFMD，我們開展了相關(guān)內(nèi)容的和應(yīng)用基礎(chǔ)研究，旨在闡明和揭示內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學(xué)特點(diǎn)、HEV71和CVA16分子流行病學(xué)特征和HEV71重癥病例的病理學(xué)特點(diǎn)。主要方法（1）采用描述性流行病學(xué)方法對2008～2011年內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學(xué)特征進(jìn)行分析。（2）應(yīng)用REALTIMEPCR方法對2010年12個(gè)盟市和2011年部分盟市門診疑似病例的標(biāo)本進(jìn)行病原鑒定，然后進(jìn)行病毒分離，應(yīng)用REALTIMEPCR方法對病毒分離物進(jìn)行鑒定，對鑒定為其它HEV的陽性分離物進(jìn)行VP4編碼區(qū)基因擴(kuò)增及核苷酸序列測定和分析。從臨床診斷分別為普通型病例、重型病例的HFMD患者臨床標(biāo)本中分離到的HEV71隨機(jī)選取代表株進(jìn)行VP1編碼區(qū)基因擴(kuò)增及核苷酸序列測定和分析，應(yīng)用MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株與HEV71其它各基因型和基因亞型的代表株的親緣進(jìn)化關(guān)系；從選取的HEV71代表株中按年代和癥狀不同隨機(jī)選取12株進(jìn)行基因組全長測序和分析，應(yīng)用SIMPLOT軟件分析和MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行HEV71代表株與A組其他腸道病毒的相似性和親緣進(jìn)化關(guān)系。（3）對2010年在12個(gè)盟市和2011年在部分盟市門診采集的疑似HFMD病例的臨床標(biāo)本進(jìn)行病毒分離，應(yīng)用REALTIMEPCR方法對病毒分離物進(jìn)行CVA16鑒定。從臨床診斷分別為普通型病例、重型病例的手足口病患者臨床標(biāo)本中分離到的CVA16隨機(jī)選取代表株進(jìn)行VP1編碼區(qū)基因擴(kuò)增及核苷酸序列測定和分析，與CVA16其它各基因型和基因亞型的代表株和內(nèi)蒙古2007年和2008年的代表株構(gòu)建親緣性進(jìn)化樹；從選取的CVA16代表株中按照癥狀的不同選取6株進(jìn)行基因組全長序列測定和分析，應(yīng)用SIMPLOT軟件和MAGE50軟件分析內(nèi)蒙古自治區(qū)流行CVA16代表株與其他腸道病毒的相似性和親緣進(jìn)化關(guān)系。（4）對2010年河南省1例HEV71引起的死亡病例進(jìn)行尸體剖檢，并將多個(gè)組織分別進(jìn)行福爾馬林處理和液氮保存，并分別進(jìn)行病理學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測，初步探討HEV71的致病機(jī)理。研究結(jié)果（1）2010～2011年內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的發(fā)病率不同年份、月份和盟市之間不同，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著；發(fā)病高峰主要集中在6～8月，比南方城市的高峰期推遲一個(gè)月；發(fā)病人群主要集中在1～10歲尤其是1～4歲，占總發(fā)病人的8233；男性發(fā)病率高于女性發(fā)病率，構(gòu)成比為151，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著，同時(shí)盟市人口的發(fā)病率比旗縣人口的發(fā)病率高，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異顯著。（2）內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的主要病原是CVA16和HEV71，同時(shí)從個(gè)別HFMD患者的臨床標(biāo)本中分離出10株其他腸道病毒，重癥病例中以HEV71為主；內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株屬于C4基因亞型C4A進(jìn)化分支，并且存在多個(gè)傳播鏈；內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的HEV71代表株與2008年北京代表株親緣關(guān)系比2007年內(nèi)蒙古代表親緣關(guān)系近，說明內(nèi)蒙古自治區(qū)流行HEV71不是獨(dú)立進(jìn)化的，而是與中國流行的HEV71在共同進(jìn)化；2010～2011年流行的HEV71代表株與2008臺灣代表株來源于同一個(gè)原始株，經(jīng)重組和親緣進(jìn)化關(guān)系樹分析發(fā)現(xiàn)，2010～2011年流行的HEV71代表株與A組腸道病毒發(fā)生了重組，并以非編碼區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)為主。（3）內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的CVA16代表株均屬于B1基因亞型的兩大進(jìn)化分支B1A和B1B，并且存在多個(gè)傳播鏈，有兩條優(yōu)勢傳播鏈；與2009年山東、北京和2010年河南的代表株親緣關(guān)系很近，說明內(nèi)蒙古自治區(qū)流行的CVA16不是獨(dú)立進(jìn)化的，而是與中國流行的CVA16共同進(jìn)化；2010年B1B分支的CVA16與2009年上海代表株來源于同一個(gè)原始株，屬于B1A進(jìn)化分支的CVA16與2011年泰國的代表株來源于同一個(gè)原始株，同時(shí)B1B分支的CVA16進(jìn)化的比較快；經(jīng)相似性和親緣進(jìn)化關(guān)系樹分析發(fā)現(xiàn)，2010年流行的CVA16代表株與A組腸道病毒發(fā)生了重組，并以非編碼區(qū)和非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)為主，而且非結(jié)構(gòu)蛋白編碼的核苷酸與HEV71原型株同源性很近，提示CVA16與HEV71發(fā)生重組。（4）HEV71死亡病例尸體眼觀病變主要表現(xiàn)為肺淤血、水腫，支氣管管腔內(nèi)可見灰白色黏稠液體；腦水腫，蛛網(wǎng)膜下腔充血、出血。主要病理組織學(xué)病變?yōu)槟X脊髓發(fā)生水腫、管套形成、衛(wèi)星現(xiàn)象、嗜神經(jīng)元現(xiàn)象，推測HEV71引起了非化膿性腦脊髓炎；肺水腫、肺泡結(jié)締組織增生、肺泡腔內(nèi)透明膜形成、粉紅色漿液滲出、巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤、肺泡Ⅱ型細(xì)胞脫落，推測HEV71引起了病毒性肺炎。該病例的主要受害器官是腦脊髓和肺臟。免疫組化檢測，不但在神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)了HEV71抗原信號，還在肺、支氣管、闌尾、胃、十二指腸、肝、空腸、脾、胸腺、胰、腎組織細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)陽性信號。據(jù)此推測HEV71是一種泛嗜性病毒；該病毒可通過多種細(xì)胞內(nèi)增殖（包括血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖）經(jīng)血液循環(huán)在機(jī)體內(nèi)完成擴(kuò)散；主侵器官是腦脊髓和肺臟，直接致死原因是神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂和呼吸衰竭。結(jié)論（1）本文闡明了內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的流行病學(xué)規(guī)律，闡明了HFMD的發(fā)病時(shí)間、易感人群和地區(qū)分布與全國其它地區(qū)的異同點(diǎn)，以及其自身的規(guī)律性。（2）本文確定了內(nèi)蒙古自治區(qū)HFMD的病原譜以HEV71、CVA16為主，和兼有其他腸道病毒如CVB4參與致本病。（3）揭示了CVA16和HEV71的主要分子生物學(xué)特征（包括分子流行病學(xué)、病毒基因特征、進(jìn)化關(guān)系等）。（4）豐富了HEV71致病的病理學(xué)特征，并在神經(jīng)組織、肺臟、支氣管、胃腸道、肝臟、胰腺、腎臟和脾臟內(nèi)發(fā)現(xiàn)了HEV71抗原信號。

簡介：青島大學(xué)博士學(xué)位論文EB病毒相關(guān)胃癌腫瘤相關(guān)基因表現(xiàn)遺傳學(xué)調(diào)節(jié)機(jī)制的研究姓名劉霞申請學(xué)位級別博士專業(yè)神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師羅兵20120602意義WNT5AML／M2∥3．500，P0．061；WNT5AM3／M4F一2．286，P0．131。④QPCR檢測結(jié)果顯示，去甲基化藥物AZA作用EBV陽性胃癌細(xì)胞系SUN719可以重新激活WNT5A，恢復(fù)其表達(dá)。⑤重組質(zhì)粒PCDNA3．1．WNT5A轉(zhuǎn)染EBV陽性胃癌細(xì)胞系SNU719，WESTERNBLOTTING結(jié)果顯示，外源性WNT5A表達(dá)可以顯著抑制WNT／13．CATENIN信號通路中13CATENIN表達(dá)。⑥與質(zhì)粒對照組及變異型WNT5A重組質(zhì)粒組比較，轉(zhuǎn)染野生型WNT5A重組質(zhì)粒的SUN719細(xì)胞C．JUN和C．MYC表達(dá)水平?jīng)]有發(fā)生顯著變化；而JUNB表達(dá)明顯升高，ATF2和EGFR轉(zhuǎn)錄表達(dá)顯著降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義PO．05。⑦EBVAAC和EBVNGC組織中I曲基因啟動(dòng)子甲基化檢出率分別為80．O％24／30和50．O％19／38，差異有顯著性F6．490，P0．011；EBVAGC和EBVNGC組織中TGF．131啟動(dòng)子基因甲基化檢出率分別為50．O％，15／30和36．8％，14／38，差異無顯著性薩1．187，P0．276。EBVAGC和EBVNGC組織中RB蛋白表達(dá)率分別為43．3％13／30和63．2％24／38，TGF．131蛋白表達(dá)率分別為56．7％17／30和63．2％24／38，差異均無顯著性R．B2．656，P0．103TGF．B1FO．295，P0．587。胃癌組織中RB和TGF．131啟動(dòng)子基因甲基化與其蛋白表達(dá)無明顯負(fù)相關(guān)RB2．943，P0．086，R0．208；TGF一131F3．051，P0．081，R0．212。胃癌組織中RB啟動(dòng)子基因甲基化、RB蛋白表達(dá)缺失以及TGF．131蛋白表達(dá)與病人年齡、性別、分化程度和腫瘤部位無相關(guān)性，但與腫瘤浸潤深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)滬均0．05；TGF．P1啟動(dòng)子基因甲基化與病人年齡、性別、分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性，但與腫瘤浸潤深度和腫瘤部位相關(guān)尸均0．05。⑨與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染脂質(zhì)體組比較，SIRNA．LMPL和SIRNA．I。MPITGF．P1轉(zhuǎn)染EBV陽性細(xì)胞GT38，均可導(dǎo)致GT38細(xì)胞MMP9，SURVIVIN和ICAML表達(dá)降低，而CDK4表達(dá)升高，差異均有顯著性尸均0．05；SIRNALMPITGF．131轉(zhuǎn)染組EGFR表達(dá)水平顯著高于對照組尸O．05，而SIRNA．LMPL組與對照組比較無顯著性差異。⑩與對照組比較，TGF．B1作用可導(dǎo)致EBV陽性GT38細(xì)胞ICAM．1的表達(dá)顯著降低，差異有顯著性P0．05，而在EBV陽性細(xì)胞系SNU719和EBV陰性細(xì)胞系SGC7901和HGC．27ICAM．1的表達(dá)無顯著差異；TGF．131作用對4種細(xì)胞系MMP9．SURVIVIN．CDK4和EGFRMRNA的轉(zhuǎn)錄表達(dá)無明顯影響。結(jié)論①EBV陰性細(xì)胞系中WNT5A的表達(dá)較為普遍，而在EBV陽性細(xì)胞系中則表達(dá)缺失或下調(diào)，去甲基化試劑處理可誘使EBV陽性細(xì)胞系WNT5A的重新表達(dá)，WNT5A編碼基因啟動(dòng)子區(qū)高甲基化是EBV陽性細(xì)胞系WNT5A表達(dá)缺失或下調(diào)的重要機(jī)制。②EBVAGC組織中WNT5A編碼基因啟動(dòng)子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)，且其甲基化狀態(tài)明顯高于EBVNGC，提示W(wǎng)NT5A參與EBVAGC的發(fā)生發(fā)展，可能是EBVAGC重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)志。③外源性WNT5A的表達(dá)可誘導(dǎo)EBV陽性細(xì)胞系SNU719中某蝗細(xì)胞因子，如13CATENIN、JUNB、ATF2、EGFR表達(dá)水平的變化，這些變化可以抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，提示W(wǎng)NT5A在EBVAGC發(fā)

簡介：蘭州地區(qū)小兒病毒性腹瀉的臨床流行病學(xué)研究目的腹瀉病毒感染是導(dǎo)致全球兒童急性腹瀉的重要原因。改善公共衛(wèi)生條件不能有效地減少病毒性腹瀉的發(fā)病率，而且臨床上缺乏特效藥，開發(fā)和應(yīng)用疫苗免疫接種是預(yù)防控制病毒性腹瀉的有效途徑。我們在本課題組前期研究的基礎(chǔ)上就蘭州地區(qū)2004年7月2005年6月病毒性腹瀉的病原體及其流行特點(diǎn)進(jìn)行了研究，以期全面了解蘭州地區(qū)導(dǎo)致嬰幼兒腹瀉的四種主要病毒的臨床分子流行病學(xué)特點(diǎn)，為本地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉的預(yù)防控制積累資料，也為針對性地研制相關(guān)疫苗提供流行病學(xué)依據(jù)。方法；收集蘭州大學(xué)第一醫(yī)院兒科2004年7月2005年6月5歲以下住院腹瀉患兒400例的糞便標(biāo)本，分別采用DAKO公司酶免疫試劑盒檢測輪狀病毒、杯狀病毒、星狀病毒、腺病毒檢測采用酶免疫法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RTPCR法。對輪狀病毒、星狀病毒陽性標(biāo)本用RTPCR進(jìn)行毒株分型鑒定。對杯狀病毒陽性標(biāo)本測序分型，星狀病毒陽性標(biāo)本的不同型別測序鑒定并與參考株比較繪制遺傳進(jìn)化樹。結(jié)果；400份標(biāo)本中四種病毒檢測陽性率依次為輪狀病毒473％、杯狀病毒155％、星狀病毒95％、腺病毒75％。其中有混合感染的病例數(shù)占135％。輪狀病毒毒株G血清型分型結(jié)果為G2344％、G3328％、G111％、不同型混合感染58％、未能分型259％，P基因型分型結(jié)果為P445％、P8221％、未能分型329％。G型與P型組合P4G2436％、P8G3256％，P4G3138％、P8G232％、P4G1和P8G1各1例。38株星狀病毒血清分型結(jié)果為1型578％、3型26％、8型26％、未能分型368％。31株杯狀病毒經(jīng)測序分型其中24株為諾如病毒，有17株為GⅡ4、6株為GⅡ3、1株為GⅡ7、4株為札如病毒GⅡSGⅡA。病毒性腹瀉的高發(fā)季節(jié)1012月是輪狀病毒發(fā)病的高峰季節(jié)。發(fā)病年齡主要為2歲以下嬰幼兒。其他病毒在本研究中規(guī)律性不強(qiáng)。結(jié)論蘭州地區(qū)嬰幼兒病毒性腹瀉的病原復(fù)雜，輪狀病毒仍是最主要病原，本年度輪狀病毒的主要流行株為P4G2，與往年明顯不同，杯狀病毒GGⅡ4型和星狀病毒1型分別為主要的流行株，不同病原混合感染比例較大，值得重視。