簡(jiǎn)介：NGS與ACGH在胚胎植入前遺傳學(xué)篩查中的在胚胎植入前遺傳學(xué)篩查中的應(yīng)用比較研究應(yīng)用比較研究海溧培養(yǎng)類(lèi)別全日制學(xué)位類(lèi)型專(zhuān)業(yè)學(xué)位一級(jí)學(xué)科專(zhuān)業(yè)類(lèi)臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科專(zhuān)業(yè)婦產(chǎn)科學(xué)研究方向胚胎植入前遺傳學(xué)篩查指導(dǎo)教師王曉紅教授（主任醫(yī)師）培養(yǎng)單位唐都醫(yī)院婦產(chǎn)科二O一七年五月UDC618密級(jí)公開(kāi)第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄縮略語(yǔ)表1中文摘要3英文摘要5前言7文獻(xiàn)回顧91非整倍體92高齡婦女103反復(fù)自然流產(chǎn)114反復(fù)胚胎種植失敗125胚胎植入前遺傳學(xué)篩查技術(shù)13正文241研究對(duì)象242研究方法243結(jié)果294討論44小結(jié)54參考文獻(xiàn)55附錄64個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果78致謝79

簡(jiǎn)介：研究目的我們根據(jù)其臨床表型及影像學(xué)資料對(duì)150例肢端發(fā)育畸形的患者進(jìn)行分類(lèi)，初步了解各種表型的發(fā)病情況，并發(fā)現(xiàn)新的肢端發(fā)育畸形。在對(duì)150例患者進(jìn)行分類(lèi)后，我們發(fā)現(xiàn)一例雙足畸形的患兒，我們收集該雙足畸形的家系，并對(duì)該家系進(jìn)行全外顯子測(cè)序，測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行多步驟過(guò)濾分析，篩選出與雙足畸形相關(guān)的致病基因。方法及內(nèi)容我們收集整理了20002009年就診于天津醫(yī)院骨科的150例肢端發(fā)育畸形患者的臨床病例資料及影像學(xué)資料，并按照下述方法進(jìn)行分類(lèi)總結(jié)（1）多指（趾）畸形根據(jù)多余指（趾）所在的位置，多指（趾）分為軸前多指（趾）、中央多指（趾）以及軸后多指（趾）。按照ROTTERDAM分類(lèi)將軸前多指分為八型，其中Ⅳ型又分為五種不同的亞型。軸后多指（趾），根據(jù)其多余指（趾）發(fā)育的成熟度分為A、B兩型A型多指（趾），其多余指（趾）發(fā)育為完全的指骨，而B(niǎo)型多指（趾），多余指（趾）為軟組織包圍的贅生指。（2）并指（趾）畸形其新的分類(lèi)在TEMTAMY和MCKUSICK的分類(lèi)基礎(chǔ)上結(jié)合了臨床表型、基因型、分子遺傳學(xué)研究進(jìn)展，將并指分為9型，Ⅰ型又分為AD四種亞型。（3）短指（趾）畸形根據(jù)BELL解剖學(xué)分型，將短指畸形分為AE五型，A型又分為A1A6六種亞型。（4）由于多指（趾）、并指（趾）、短指（趾）等表型可以是一些綜合征的特征性表現(xiàn)，我們可以通過(guò)患者是否同時(shí)存在其他各器官系統(tǒng)的先天性病變來(lái)分析患者是否可能為某一綜合征。（5）對(duì)收集到的肢端發(fā)育畸形的患者進(jìn)行分類(lèi)后，歸納總結(jié)特殊的表型。對(duì)150例患者進(jìn)行分類(lèi)后我們發(fā)現(xiàn)一例雙足畸形的患兒。由于目前只有關(guān)于雙足畸形小鼠模型的報(bào)道，而人類(lèi)的雙足畸形病例（僅累及單側(cè)下肢）尚未見(jiàn)報(bào)道，其具體機(jī)制還不清楚，因此我們選取雙足畸形這一肢端畸形為研究對(duì)象，收集患者及父母兩代人的全血標(biāo)本，提取外周血基因組DNA，DNA樣品進(jìn)行質(zhì)檢，純化后，應(yīng)用華大基因公司的ILLUMINAHISEQ2000高通量測(cè)序平臺(tái)以及CG測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行全基因組外顯子的測(cè)序。測(cè)序數(shù)據(jù)與人類(lèi)HAPMAP8、DBSNP130、1000GENOMEPROJECT數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，過(guò)濾掉已報(bào)道的常見(jiàn)的基因多態(tài)性位點(diǎn)，濾過(guò)同義突變，將患者及其父母的單核苷酸非同義突變、插入缺失突變及基因拷貝數(shù)變異的測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)、整合分析，初步篩選出可能的致病基因，然后采用SANGER測(cè)序?qū)蜻x基因進(jìn)行驗(yàn)證。研究結(jié)果1121例患者表現(xiàn)為多指（趾）畸形，40例患者表現(xiàn)為軸后多指（趾），4例表現(xiàn)為單純的中央型多趾，其中兩例患者同時(shí)合并軸后多趾；78例患者表現(xiàn)為軸前多指（趾）；1例為左足多足畸形。85例多指畸形中79例為軸前多指，6例為軸后多指；65例多趾畸形中，6例表現(xiàn)為軸前多趾，4例為中央型多趾，56例為軸后多趾。2軸后多指（趾）均為發(fā)育完全的指（趾）骨，為T(mén)YPEA型。軸前多指（拇指多指）Ⅱ型22例，Ⅲ型2例，Ⅳ型36例，Ⅴ型2例，Ⅵ型6例，11例由于資料不完善尚無(wú)法分型。331例患者表現(xiàn)為并指（趾）畸形，SDⅠ型11例，其中SDⅠC型7例，SDⅠD型4例；SDⅡ（SPD）6例；SDⅢ型4例；SDⅤ型1例；SDⅥ型3例。1例患者34足趾并趾；2例為12足趾并趾；3例為234并指畸形，對(duì)上述六例并指畸形患者的表型，目前分類(lèi)尚無(wú)法將其納入其中。4收集到的病例中，短（趾）畸形多存在于并指（趾）或者多指（趾）畸形中。短指（趾）畸形患者5例，其中4例患者同時(shí)存在多指（趾）或者并指（趾）畸形。1例為BDA3型，4例無(wú)法歸入短指（趾）畸形的分型中。5我們發(fā)現(xiàn)一些特殊的表型（1）雙足畸形，患者左足復(fù)足畸形；（2）SDⅤ型同時(shí)合并雙眼距寬、眼球突出、前額寬；（3）軸前多指Ⅱ型合并右位心、孤立腎、左腎缺如；（4）24并指且中節(jié)指骨缺如合并先天性心臟??；（5）雙足軸后多趾合并先天性心臟病；（6）軸前多指Ⅳ型、大魚(yú)際肌缺失、上唇唇裂；（7）右手外形短小、25指并指、右上肢長(zhǎng)度、周徑較對(duì)側(cè)短，同時(shí)合并右側(cè)胸廓塌陷。6雙足畸形外顯子測(cè)序結(jié)果篩選后，患兒與父母親都不同的錯(cuò)義突變?yōu)?0個(gè)，插入缺失（INDELS）突變?yōu)?4個(gè)，與肢端發(fā)育相關(guān)的新發(fā)基因突變有HOXD13和R2，兩個(gè)基因發(fā)生了錯(cuò)義突變。7SANGER測(cè)序的結(jié)果患兒母親檢測(cè)出與患兒相同的HOXD13基因突變GLY11ALA，患兒父親未檢測(cè)到該突變。結(jié)論1多指（趾）畸形為最常見(jiàn)的肢端發(fā)育畸形，累及手指的多指畸形以軸前多指常見(jiàn)，而累及足趾的多趾畸形以軸后多趾常見(jiàn)，中央型多指（趾）最為少見(jiàn)；軸前多指以Ⅳ型最為常見(jiàn)，Ⅱ型次之。并指畸形具有很大的異質(zhì)性，其中SDⅠ型為最常見(jiàn)的表型。短指畸形多合并其他手部畸形而存在，如多指、并指。2我們發(fā)現(xiàn)一些特殊的表型1例左足雙足畸形，1例患者可能為POL綜合征。3我們發(fā)現(xiàn)一例雙足畸形患者，該患者存在HOXD13基因的錯(cuò)義突變（GLY11ALA）突變，患者母親攜帶相同的突變，卻沒(méi)有表現(xiàn)出該表型。

簡(jiǎn)介：目的觀察MIMP對(duì)炎癥性腸病小鼠的腸道炎癥及腸道微生態(tài)的影響；探究MIMP對(duì)炎性細(xì)胞因子的作用效果和調(diào)節(jié)方式，并探討相關(guān)作用機(jī)制。方法（1）將小鼠分為3組DSSMIMP組，DSS組和健康對(duì)照組。干預(yù)期間，觀察小鼠體重變化情況，腹瀉、血便、死亡等發(fā)生率，觀察各組小鼠腸道整體情況并制作HE染色切片，觀察腸上皮組織病理學(xué)的改變；利用右旋糖苷異硫氰酸熒光素（FLUESCEINISOTHIOCYANATEDEXTRANFITCDEXTRAN）灌胃，檢測(cè)小鼠活體腸道通透性，并利用蛋白質(zhì)印跡（WESTERNBLOT）和實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)REALTIMEQUANTITATIVEPCRQRTPCR檢測(cè)各組小鼠腸道上皮中緊密連接蛋白（JAM1OCCLUDINZO1）的表達(dá)水平；利用QRTPCR檢測(cè)各組小鼠腸道上皮中炎性細(xì)胞因子IFNΓIL17IL23IL4IL10）的表達(dá)利用16SRRNA測(cè)序技術(shù)檢測(cè)各組小鼠腸道微生態(tài)的變化情況。（2）利用類(lèi)小腸上皮細(xì)胞的CACO2細(xì)胞和外周血單核細(xì)胞（PBMCS）在TRANWELLS條件下建立共培養(yǎng)模型，利用脂多糖LIPOPOLYSACIDELPS作為炎癥刺激，利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定ELISA檢測(cè)MIMP在不同濃度及不同孵育時(shí)間下對(duì)腸道微環(huán)境中炎性細(xì)胞因子IFNΓIL17IL23IL4IL10）的調(diào)節(jié)情況。利用ELISA和QRTPCR檢測(cè)TLR4抑制劑對(duì)LPS介導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子分泌水平的影響，并與MIMP的作用效果相互比較。利用WESTERNBLOT檢測(cè)MIMP和TLR4抑制劑對(duì)MAPK及NFΚB通路的調(diào)節(jié)情況，并利用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)MIMP在不同濃度及不同孵育時(shí)間下對(duì)NFΚB活性影響的變化趨勢(shì)。（3）利用WESTERNBLOT檢測(cè)MIMP及TLR4抑制劑對(duì)由LPS介導(dǎo)的CACO2細(xì)胞整體水平的組蛋白（H3H4）乙?；恼{(diào)節(jié)情況，利用染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)CHIP技術(shù)檢測(cè)MIMP在不同濃度及不同孵育時(shí)間下對(duì)具體水平的IL17及IFNΓ上游啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白（H3H4）乙?；恼{(diào)節(jié)情況；利用QRTPCR檢測(cè)MIMP對(duì)LPS介導(dǎo)的組蛋白去乙?；窰ISTONEDEACEYLASEHDAC表達(dá)水平的調(diào)節(jié)情況。結(jié)果（1）與DSS組小鼠相比，MIMPDSS組整體情況較好，體重減輕程度輕，腹瀉、便血及死亡發(fā)生率低，疾病活動(dòng)指數(shù)顯著下降；MIMP不但可以改善腸道整體情況，提高腸道長(zhǎng)度P（2）在共培養(yǎng)模型中，MIMP可扭轉(zhuǎn)因LPS引起的炎性細(xì)胞因子的分泌，降低促炎性細(xì)胞因子（IFNΓIL17IL23）的水平，升高抑炎性細(xì)胞因子（IL4IL10）的水平；且MIMP的調(diào)節(jié)存在一定的劑量與時(shí)間依賴性，在特定濃度和時(shí)間時(shí)1NGML12H，MIMP的作用效應(yīng)最為顯著；同時(shí)抑制性實(shí)驗(yàn)證實(shí)MIMP與TLR4抑制劑具有相同的調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子的能力；此外，MIMP和TLR4抑制劑均可有效阻斷MAPK及NFΚB通路激活，且隨著MIMP劑量的提高和時(shí)間的延長(zhǎng)，NFΚB的活性也呈現(xiàn)階梯狀下降趨勢(shì)。（3）LPS可使得組蛋白（H3H4）整體水平的乙酰化程度提高，而MIMP與TLR4抑制劑干預(yù)可有效降低其乙?；潭?，并存在劑量依賴性；在具體水平中，隨著劑量的提高和時(shí)間的延長(zhǎng)，MIMP可有效降低IL17和IFNΓ上游啟動(dòng)子區(qū)域組蛋白（H3H4）的乙?；潭龋煌瑫r(shí)，MIMP還可以顯著上調(diào)部分HDAC的表達(dá)。結(jié)論MIMP可有效改善IBD小鼠的炎癥狀態(tài)及腸屏障功能，顯著下調(diào)促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，上調(diào)抑炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，并糾正IBD小鼠的腸道微生態(tài)紊亂；MIMP可通過(guò)一定劑量和時(shí)間依賴的方式調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子的分泌，并可有效阻斷MAPK及NFΚB信號(hào)通路的激活；MIMP可有效降低整體及具體水平的組蛋白乙?；潭龋岣逪DAC的表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)了MIMP改善腸道炎癥的現(xiàn)象并闡明其相關(guān)機(jī)制，擴(kuò)展了人們對(duì)于炎癥治療的認(rèn)識(shí)，具有一定的理論創(chuàng)新。

簡(jiǎn)介：疼痛是臨床上最常見(jiàn)的癥狀之一，外周組織損傷或疾病產(chǎn)生的疼痛若不及時(shí)治療或治療方案和藥物使用不恰當(dāng)，急性疼痛往往發(fā)展成慢性疼痛（持續(xù)時(shí)間大于3個(gè)月）。慢性痛的形成，需要大量基因共同參與，最近研究報(bào)道，慢性神經(jīng)痛大鼠脊髓背根節(jié)上124％的基因表達(dá)上調(diào)而7％的卻下降。這些基因的產(chǎn)物可以長(zhǎng)時(shí)程地、穩(wěn)定地調(diào)控慢性痛產(chǎn)生所需要的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)適應(yīng)性，而持續(xù)穩(wěn)定地改變基因表達(dá)、可遺傳性，是表觀遺傳調(diào)控兩個(gè)最主要特征。我們以往的工作表明，持續(xù)痛環(huán)境下，眾多表觀遺傳標(biāo)志蛋白表達(dá)發(fā)生了改變，并伴隨大量基因表達(dá)的變化。因此，我們提出假設(shè)，表觀遺傳調(diào)控的基因轉(zhuǎn)錄活性變化介導(dǎo)了慢性痛的產(chǎn)生和維持。然而，在持續(xù)疼痛的環(huán)境下，疼痛相關(guān)的中樞神經(jīng)組織和系統(tǒng)，表觀遺傳標(biāo)志物和基因表達(dá)模式發(fā)生了何種變化，這些表觀遺傳標(biāo)志物如何調(diào)控了這些基因表達(dá)變化，及其如何貢獻(xiàn)于慢性痛的形成，尚不明朗。疼痛誘導(dǎo)的表觀遺傳學(xué)改變是一個(gè)可逆過(guò)程，因此，理論上恢復(fù)疼痛處理系統(tǒng)中異常的表觀遺傳形態(tài)，會(huì)解除疼痛，抑制慢性痛的形成。越來(lái)越多的研究集中在識(shí)別和制定新的藥物，主要是針對(duì)轉(zhuǎn)錄機(jī)制中可以扭轉(zhuǎn)疼痛帶來(lái)的表觀遺傳變化的調(diào)控元件。眾多作用于表觀遺傳修飾系統(tǒng)的化合物可以有效地對(duì)抗癌癥細(xì)胞，如組蛋白去乙?；敢种苿┊惲u肟酸SAHA，也稱(chēng)沃雷諾司，已通過(guò)美國(guó)FDA批準(zhǔn)。表觀遺傳療法用于癌癥的初步成效為類(lèi)似的方法解決慢性痛做好了準(zhǔn)備，這是有別于傳統(tǒng)疼痛癥狀治療的新方法?；谝陨咸岢龅膯?wèn)題，本研究聯(lián)合運(yùn)用生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫組織化學(xué)、電生理學(xué)、病毒和行為學(xué)等技術(shù)手段研究慢性痛環(huán)境下，中樞神經(jīng)系統(tǒng)表觀遺傳調(diào)控的基因表達(dá)活性改變?nèi)绾呜暙I(xiàn)于慢性痛產(chǎn)生，在此基礎(chǔ)上提出緩解疼痛的可能方案。本研究主要發(fā)現(xiàn)1持續(xù)炎性狀態(tài)下，組蛋白乙酰化調(diào)控的BDNF表達(dá)增加，通過(guò)激活TRKB，經(jīng)過(guò)PLCPKC信號(hào)通路啟動(dòng)中縫大核NRM中GLUA1亞基的突觸轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生慢性疼痛行為。2HDAC抑制劑增加GAD65活性，恢復(fù)GABA突觸的抑制功能，并減輕痛敏行為。我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，BDNFTRKB信號(hào)通路調(diào)節(jié)的GAD65在突觸末端聚集，對(duì)HDAC抑制劑誘導(dǎo)的鎮(zhèn)痛中具有至關(guān)重要的作用。3神經(jīng)損傷狀態(tài)下HDAC抑制劑表觀遺傳上調(diào)神經(jīng)生長(zhǎng)因子NGF表達(dá)，后者通過(guò)TRKAPLCIP3CAMKⅡ信號(hào)通路介導(dǎo)D（Δ阿片受體）突觸遷移。Δ阿片受體激動(dòng)劑與HDAC藥物聯(lián)合使用緩解疼痛行為。4阿片類(lèi)藥物在鎮(zhèn)痛的同時(shí)，可產(chǎn)生強(qiáng)烈的獎(jiǎng)賞效應(yīng)，從而導(dǎo)致藥物濫用和成癮的風(fēng)險(xiǎn)。過(guò)去一直認(rèn)為疼痛誘導(dǎo)的負(fù)向情緒可以抑制藥物濫用，本研究卻發(fā)現(xiàn)，疼痛增加了嗎啡獎(jiǎng)賞效應(yīng)，降低嗎啡產(chǎn)生獎(jiǎng)賞效應(yīng)的閾值。慢性痛模型的小鼠大腦中央杏仁核CEA，組蛋白二甲基化轉(zhuǎn)移酶G9A的表達(dá)發(fā)生明顯下調(diào)，繼而降低了眾多疼痛相關(guān)基因啟動(dòng)子上的組蛋白二甲基化水平，使得這些基因的轉(zhuǎn)錄活性增加。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，G9A表達(dá)下調(diào)是通過(guò)MECP2調(diào)控的表觀遺傳學(xué)機(jī)制。此外，MECP2可實(shí)現(xiàn)特異性調(diào)控谷氨酸神經(jīng)元的活性。我們?cè)诒碛^遺傳水平揭示了MECP2G9ABDNF通路介導(dǎo)疼痛對(duì)阿片獎(jiǎng)賞效應(yīng)易化的分子機(jī)制。本研究主要從表觀遺傳角度，揭示慢性痛環(huán)境下，神經(jīng)環(huán)路產(chǎn)生不良適應(yīng)性的分子生物學(xué)基礎(chǔ)，闡明其在慢性疼痛形成和維持中的作用，為理解慢性痛的頑固性提供了全新的視角。

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)教育碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論教育碩士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文題目目以“中心法則”以“中心法則”核心概念核心概念為主線的為主線的遺傳學(xué)專(zhuān)題遺傳學(xué)專(zhuān)題復(fù)習(xí)教學(xué)設(shè)計(jì)復(fù)習(xí)教學(xué)設(shè)計(jì)TITLETHETEACHINGDESIGNOFTHEGEICTOPICREVIEWBASEDONTHEKEYCONCEPTMAINLINEOF“CENTRALDOGMA”學(xué)科專(zhuān)業(yè)業(yè)學(xué)科教學(xué)學(xué)科教學(xué)生物生物作者姓名名程婷導(dǎo)師及職導(dǎo)師及職稱(chēng)稱(chēng)聶劉旺聶劉旺教授教授論文提交日期論文提交日期2013年11月授予學(xué)位日期授予學(xué)位日期現(xiàn)工作單現(xiàn)工作單位位蕪湖市火龍崗中學(xué)蕪湖市火龍崗中學(xué)安徽師范大學(xué)學(xué)位評(píng)定委員會(huì)辦公安徽師范大學(xué)學(xué)位評(píng)定委員會(huì)辦公室本論文經(jīng)答辯委員會(huì)全體委員審查，確認(rèn)符合安徽師范大學(xué)碩士學(xué)位論文質(zhì)量要求。答辯委員會(huì)簽名主席工作單位、職稱(chēng)委員導(dǎo)師

簡(jiǎn)介：第一章中國(guó)大陸地區(qū)中小學(xué)學(xué)生脊柱側(cè)凸的患病率系統(tǒng)評(píng)價(jià)和META分析目的通過(guò)系統(tǒng)評(píng)價(jià)及META分析的方法探討中國(guó)大陸地區(qū)中小學(xué)學(xué)生中脊柱側(cè)凸的患病率。方法電子檢索網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)PUBMED，SCOPUS，CNKI，萬(wàn)方及維普數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索時(shí)間為各個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)建庫(kù)至2014年3月1日。以“脊柱側(cè)凸”、“脊柱側(cè)彎”、“SCOLIOSIS”和“流行病學(xué)”、“患病率”、“發(fā)病率”、“普查”、“PREVALENCE”、“INCIDENCE”、“EPIDEMIOLOGY”為字詞，并通過(guò)布爾邏輯算符“”連接。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行篩選，并根據(jù)質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)。META分析采用STATA120STATACP，COLLEGESTATION，TX軟件進(jìn)行分析。結(jié)果根據(jù)檢索策略，初始檢索共檢索出427篇文獻(xiàn)，其中PUBMED71篇，SCOPUS77篇，萬(wàn)方49篇，CNKI194篇，維普36篇。經(jīng)過(guò)瀏覽標(biāo)題，根據(jù)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，最終納入38篇文獻(xiàn)，共34項(xiàng)研究。在納入34項(xiàng)研究中，脊柱側(cè)凸患病率報(bào)道范圍為011％至264％，META分析結(jié)果顯示中國(guó)大陸中小學(xué)生脊柱側(cè)凸患病率為102％95％CI，085118，其中34項(xiàng)研究報(bào)道了特發(fā)性脊柱側(cè)凸的患病率，META分析結(jié)果顯示中國(guó)大陸中小學(xué)生特發(fā)性脊柱側(cè)凸患病率為093％95％CI072114。亞組分析顯示脊柱側(cè)凸在男性及女性中的患病率分別為087％95％CI，072103和122％95％CI，101142。女性患病與男性患病比率為15495％CI，135174，女性患者明顯多于男性患者P＜001。COBB角在1020，2040，大于40中的三組患病率分別為074％95％CI，057091133‰95％CI104161和025‰95％CI017032。510歲，1114歲和1520歲三個(gè)年齡段人群患病率分別為073％95％CI055090097％95％CI075119和114％95％CI086142。結(jié)論中國(guó)大陸地區(qū)中小學(xué)脊柱側(cè)凸患病率為102％，IS患病率為093％。COBB角度在1020，2040，40以上的患病率分別為074％，133‰，025‰。女性患病率明顯高于男性，比率約為154。隨著年齡增加，脊柱側(cè)凸患病率上升。第二章基因多態(tài)性與特發(fā)性脊柱側(cè)凸易感性的META分析目的通過(guò)系統(tǒng)評(píng)價(jià)及META分析的方法探討基因多態(tài)性MTNR1BMELATONINRECEPT1BRS4753426MATN1MATRILIN1GENERS1149048CHL1CLOSEHOMOLOGUEOFL1RS10510181VDRVITAMINDRECEPTBSMⅠESRESTROGENRECEPTXBAⅠPVUⅡIGF1INSULINLIKEGROWTHFACT1RS5742612LBX1LADYBIRDHOMEOBOXHOMOLOG1RS11190870MMP3MATRIXMETALLOPEPTIDASE3RS3025058和IL6INTERLEUKIN6，RS1800795與特發(fā)性脊柱側(cè)凸易感性的相關(guān)性。方法電子檢索網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)西文數(shù)據(jù)庫(kù)PUBMED，SCOPUS，中文數(shù)據(jù)庫(kù)CNKI，萬(wàn)方及維普數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索時(shí)間為各個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)建庫(kù)至2014年3月1日。以“脊柱側(cè)凸”、“脊柱側(cè)彎”、“SCOLIOSIS”和“基因”、“基因多態(tài)性”、“GENE”和“GENEPOLYMPHISM”為字詞，并通過(guò)布爾邏輯算符“”連接。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行篩選。META分析采用STATA120STATACP，COLLEGESTATION，TX軟件或者REVMAN51軟件進(jìn)行分析。結(jié)果根據(jù)檢索策略，初始檢索共檢索出2989篇文獻(xiàn)，其中PUBMED860篇，SCOPUS1482篇，萬(wàn)方147篇，CNKI278篇，維普131篇。經(jīng)過(guò)瀏覽標(biāo)題，根據(jù)納入及排除標(biāo)準(zhǔn)，最終納入36篇文獻(xiàn)。META分析結(jié)果顯示RS1149048位點(diǎn)等位基因G和VDR基因BSMⅠ位點(diǎn)等位基因A攜帶者患IS的危險(xiǎn)性分別高于等位基因AI1295％CI，102124和等位基因G15795％CI，125198的攜帶者。RS11190870等位基因C攜帶者患IS的危險(xiǎn)性低于等位基因T06395％CI，054073的攜帶者，但此相關(guān)性僅存在與女性患者中06195％CI，056065。其他基因多態(tài)性位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)與IS易感性有關(guān)。結(jié)論本研究發(fā)現(xiàn)MATN1RS1149048，VDRBSMⅠ和LBX1RS11190870三個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)與IS易感性有關(guān)。第三章全椎弓根螺釘，鉤及釘鉤混合系統(tǒng)治療青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的效果比較網(wǎng)絡(luò)META分析及系統(tǒng)評(píng)價(jià)目的通過(guò)META分析及網(wǎng)絡(luò)META分析的方法系統(tǒng)評(píng)價(jià)全椎弓根螺釘，鉤及釘鉤混合系統(tǒng)治療青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸的效果。方法電子檢索網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫(kù)西文數(shù)據(jù)庫(kù)PUBMED，SCOPUS，中文數(shù)據(jù)庫(kù)CNKI，萬(wàn)方及維普數(shù)據(jù)庫(kù)，檢索時(shí)間為各個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)建庫(kù)至2014年3月1日。以“脊柱側(cè)凸”、“脊柱側(cè)彎”、“SCOLIOSIS”和“椎弓根螺釘”、“椎弓根鉤”、“釘鉤混合系統(tǒng)”、“PEDICLESCREW”，“HOOK”和“HYBRID”為字詞，并通過(guò)布爾邏輯算符“”連接。根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)對(duì)文獻(xiàn)進(jìn)行篩選，根據(jù)文獻(xiàn)評(píng)價(jià)方法對(duì)納入文獻(xiàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)。META分析采用STATA120STATACP，COLLEGESTATIONTX或者REVMAN51軟件進(jìn)行分析，網(wǎng)絡(luò)META分析采用WINBUGS14軟件，序貫分析采用TSA軟件TSA09BETA進(jìn)行分析。結(jié)果根據(jù)檢索策略，初始檢索共檢索出2985篇文獻(xiàn)，其中PUBMED398篇，SCOPUS1796篇，萬(wàn)方231篇，CNKI325篇，維普235篇。經(jīng)過(guò)瀏覽標(biāo)題，最終納入文獻(xiàn)37篇。在矯正主彎COBB角度方面，直接META分析和網(wǎng)絡(luò)META分析結(jié)果均提示椎弓根螺釘系統(tǒng)治療青少年特發(fā)性脊柱側(cè)AIS凸優(yōu)于釘鉤混合系統(tǒng)和全椎弓根鉤系統(tǒng)，釘鉤混合系統(tǒng)優(yōu)于全椎弓根鉤系統(tǒng)。在矯正AVT，AVR，LIV傾斜角方面，直接META分析和網(wǎng)絡(luò)META分析結(jié)果均提示椎弓根螺釘系統(tǒng)治療AIS優(yōu)于釘鉤混合系統(tǒng)和全椎弓根鉤系統(tǒng)，釘鉤混合系統(tǒng)優(yōu)于全椎弓根鉤系統(tǒng)。在術(shù)中出血量方面，直接META分析和網(wǎng)絡(luò)META分析結(jié)果均提示椎弓根螺釘系統(tǒng)治療AIS低于釘鉤混合系統(tǒng)和全椎弓根鉤系統(tǒng)，釘鉤混合系統(tǒng)低于全椎弓根鉤系統(tǒng)。在融合節(jié)段方面，直接META分析和網(wǎng)絡(luò)META分析結(jié)果均未發(fā)現(xiàn)三者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在手術(shù)時(shí)間方面，直接META分析未發(fā)現(xiàn)三者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是網(wǎng)絡(luò)META分析結(jié)果提示椎弓根螺釘系統(tǒng)治療AIS低于釘鉤混合系統(tǒng)和全椎弓根鉤系統(tǒng)，釘鉤混合系統(tǒng)低于全椎弓根鉤系統(tǒng)。結(jié)論1在治療AIS的三種不同系統(tǒng)中間，全椎弓根螺釘系統(tǒng)在矯正主彎COBB角度AVT，AVR，LIV傾斜角方面優(yōu)于釘鉤混合系統(tǒng)和全椎弓根鉤系統(tǒng)，術(shù)中出血量和手術(shù)時(shí)間均低于釘鉤混合系統(tǒng)和全椎弓根鉤系統(tǒng)。2釘鉤混合系統(tǒng)在矯正主彎COBB角度，AVT，AVR，LIV傾斜角方面優(yōu)于全椎弓根鉤系統(tǒng)，術(shù)中出血量和手術(shù)時(shí)間均低于全椎弓根鉤系統(tǒng)。

簡(jiǎn)介：脊柱側(cè)凸是指患者在站立位下，冠狀位側(cè)方彎曲超過(guò)10°的三維畸形，是臨床中最為常見(jiàn)和復(fù)雜的畸形，不僅因?yàn)槠渲禄職埪矢?，手術(shù)難度大，更有大量患者伴隨有其他畸形而給臨床診斷和治療造成困難。研究與脊柱側(cè)凸相關(guān)的綜合征是理解和認(rèn)識(shí)脊柱畸形致病機(jī)理的重要手段。通過(guò)既往的探索和發(fā)現(xiàn)提示HEDGEHOG通路與可能與脊柱畸形以及與脊柱畸形伴隨的其他畸形共同相關(guān)，但仍存在著許多未解決的問(wèn)題1、由于缺乏大規(guī)模脊柱畸形隊(duì)列研究，對(duì)于脊柱畸形和其他伴隨畸形的潛在相關(guān)性仍不十分清楚2、既往的文獻(xiàn)較少報(bào)道HEDGEHOG通路基因致病導(dǎo)致的脊柱畸形報(bào)道，或缺乏專(zhuān)業(yè)性的描述，為脊柱畸形的機(jī)制研究帶來(lái)許多困難3、關(guān)于HEDGEHOG通路相關(guān)基因，近年來(lái)既有與先天性脊柱側(cè)凸的報(bào)道，又有與特發(fā)性脊柱側(cè)凸的報(bào)道，兩者是否有內(nèi)在關(guān)聯(lián)仍不清楚。因此，將試圖通過(guò)遺傳學(xué)角度，對(duì)HEDGEHOG通路基因在脊柱側(cè)凸中扮演的角色進(jìn)行進(jìn)一步探討和研究。目的與方法1、通過(guò)大規(guī)模脊柱側(cè)凸臨床隊(duì)列，尋找脊柱側(cè)凸，特別是先天性脊柱側(cè)凸與其伴隨畸形的潛在相關(guān)性2、通過(guò)外顯子捕獲測(cè)序技術(shù)，收集和設(shè)計(jì)以HEDGEHOG通路相關(guān)基因?yàn)橹鞯牟东@芯片，嘗試發(fā)掘和明確HEDGEHOG信號(hào)通路基因突變對(duì)先天性脊柱側(cè)凸人群的貢獻(xiàn)率，并進(jìn)行必要的基因型表型分析。3、基于前期對(duì)HEDGEHOG通路相關(guān)基因AKAP2在特發(fā)性脊柱側(cè)凸中的報(bào)道，驗(yàn)證大規(guī)模漢族特發(fā)性脊柱側(cè)凸人群中AKAP2基因突變的貢獻(xiàn)。結(jié)果1、在356例先天性脊柱側(cè)凸患者中，565％的患者伴隨有其他系統(tǒng)畸形。其中以脊髓神經(jīng)管畸形最為多見(jiàn)，心臟畸形次之。與單純CS相比，合并有其他畸形的患者脊柱畸形的表型更為復(fù)雜，受累節(jié)段更多。2、伴隨或單純伴隨有心臟畸形患者，其脊柱在下胸段受累更為常見(jiàn)，與單純CS的患者相比，具有明確的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3、通過(guò)設(shè)計(jì)HEDGEHOG通路相關(guān)基因捕獲芯片，在285例CS患者中進(jìn)行測(cè)序分析，發(fā)現(xiàn)12例患者攜帶有高致病性HEDGEHOG通路相關(guān)基因突變。4、通過(guò)進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析與既往文獻(xiàn)報(bào)道，認(rèn)為PTCH2PR525Q，PI1028TPTCH1PV1094M以及GLI3PP1093L，PR863C錯(cuò)義突變可能是患者的側(cè)凸及伴隨的多發(fā)畸形的致病基因，上述患者的脊柱畸形表現(xiàn)具有一定的共同點(diǎn)。5、對(duì)125例特發(fā)性脊柱側(cè)凸患者進(jìn)行AKAP2基因SANGER測(cè)序，發(fā)現(xiàn)一例患者攜帶RS765223801突變可能是其致病基因。該患者除脊柱側(cè)凸外還伴有室間隔缺損。結(jié)論1、脊柱側(cè)凸常與其他系統(tǒng)畸形共同出現(xiàn)，且脊柱畸形與其他系統(tǒng)畸形可存在一定的相關(guān)性。2、HEDGEHOG通路相關(guān)基因突變可能在脊柱側(cè)凸（包括CS和IS）及其他多系統(tǒng)畸形中扮演重要作用。

簡(jiǎn)介：111111111IIUIIIIII111Y3277473京協(xié)彳口嚼學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專(zhuān)業(yè)學(xué)生畢業(yè)論文八年制繇目錄中文摘要。1ABSTRACT第1章引言4第2章實(shí)驗(yàn)材料521研究對(duì)象522主要實(shí)驗(yàn)試劑523主要實(shí)驗(yàn)儀器624分析軟件6第3章實(shí)驗(yàn)方法731DNA的提取一732全外顯子測(cè)序833生物信息學(xué)分析934交叉對(duì)比一1235SANGEJ‘測(cè)序驗(yàn)證12第4章實(shí)驗(yàn)結(jié)果1541DNA的提取1542全外顯子測(cè)序～15413生物信息學(xué)分析1744交叉對(duì)比1945SANGEL’測(cè)序驗(yàn)證20第5章討論2251遺傳模式2252單基因致病性分析2353結(jié)論2554小結(jié)與展望25第6章參考文獻(xiàn)。26綜述陰道斜隔綜合征的病因?qū)W研究進(jìn)展29至5謝。34附錄生殖道畸形分子遺傳學(xué)研究參與者知情同意書(shū)35

簡(jiǎn)介：1圳㈣?LII||㈣㈣Ⅲ|L_II』Y3244942分類(lèi)號(hào)R1S密級(jí)單位代碼學(xué)號(hào)南京醫(yī)科犬掌博士學(xué)位論文題目墜籃曼擔(dān)差胞處掛拉固王堂佳變是生置癌曼盛性的羞璧性丞擔(dān)羞邊能堂玨窺學(xué)科專(zhuān)業(yè)鱟盎復(fù)盒星里生堂學(xué)院名稱(chēng)煎基醫(yī)牡盤(pán)堂盆基衛(wèi)生堂醫(yī)完成時(shí)間三Q二±壘五月㈣㈣II|II?㈣洲刪咖㈣Y3244942南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)的成果作品。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名吳娟導(dǎo)師簽名菇杉日期A口L7年6月』日日期矽／聲∥月／日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于請(qǐng)?jiān)谝韵孪鄳?yīng)方框內(nèi)打“√”1、保密口，在一年解密后適用本授權(quán)書(shū)。2、不保密吖作者簽名吳稿導(dǎo)師簽名EE，／月．月6移脾儼口，捫W期期

簡(jiǎn)介：近幾年來(lái)，隨著合成生物學(xué)科的不斷發(fā)展，各種新的生物學(xué)技術(shù)也應(yīng)運(yùn)而生。其中，光遺傳學(xué)技術(shù)已經(jīng)成為蓬勃發(fā)展的領(lǐng)域，通過(guò)構(gòu)建工程化的光感受器，來(lái)控制活細(xì)胞和生物體的生命行為。選擇染色體基因整合系統(tǒng)MINITN7將藍(lán)光響應(yīng)系統(tǒng)整合到銅綠假單胞菌株P(guān)AO1中。將基因整合到染色體，比起質(zhì)?？寺∠到y(tǒng)來(lái)說(shuō)，在細(xì)菌中具有更強(qiáng)的穩(wěn)定性，因?yàn)椴粫?huì)出現(xiàn)類(lèi)似質(zhì)粒丟失的情況。另外，MINITN7系統(tǒng)與其他的轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)相比，具有更高的轉(zhuǎn)化率和特定的結(jié)合位點(diǎn)，不會(huì)發(fā)生插入到基因組任意位置中的情況。本論文中提及的構(gòu)建的PDAWNTN7光控系統(tǒng)為在銅綠假單胞菌中時(shí)空性控制基因表達(dá)提供了強(qiáng)有力的支持，也可以達(dá)到精準(zhǔn)控制銅綠假單胞菌生物學(xué)行為的要求。通過(guò)在光控系統(tǒng)中引入報(bào)告基因SFGFP綠色熒光蛋白，可以觀測(cè)到藍(lán)光光感受器在銅綠假單胞菌中光誘導(dǎo)基因～20倍的表達(dá)。很多持續(xù)性的細(xì)菌感染都是由生物膜引起的。一個(gè)典型的例子是在遺傳性疾病囊性纖維化患者中，由銅綠假單胞菌生物引起的毀滅性的肺部感染，一旦銅綠假單胞菌定殖于囊性纖維化肺，形成生物膜，即使是最具侵襲性的抗生素治療也不能根除所有細(xì)菌。本研究中，在光控系統(tǒng)中引入PA2133這一功能蛋白后，可以抑制銅綠假單胞菌生物膜的形成。這是由于PA2133基因中含有EAL結(jié)構(gòu)域，這一結(jié)構(gòu)域表達(dá)的蛋白作用相當(dāng)于磷酸二酯酶，磷酸二酯酶可以降解CDIGMP，CDIGMP刺激生物膜中粘性物質(zhì)和胞外聚合物的生物合成，而降解后引起細(xì)菌的分離，從而PA2133的過(guò)量表達(dá)可以引起生物膜的降解。由此，本論文為生物膜的防治提供了一種新的思路。

簡(jiǎn)介：目的MYH9相關(guān)綜合征MYH9RD是MYH9基因突變導(dǎo)致的，具有耳聾、腎炎、白內(nèi)障或凝血障礙等一種或多種臨床癥狀的遺傳病。因MYH9RD屬于罕見(jiàn)病，它的血象與特發(fā)性血小板減少性紫癜ITP相似，醫(yī)院常將MYH9RD誤診為ITP，做不必要的激素治療甚至是脾切除手術(shù)。因此對(duì)疑似MYH9RD患者進(jìn)行基因診斷十分必要。本研究通過(guò)MYH9基因測(cè)序，從基因水平上對(duì)誤診為ITP的一家系患者作出確診，找到致病突變并分析基因型與表型的關(guān)系，對(duì)家系患者進(jìn)行遺傳學(xué)分析。方法采集家系患者和健康對(duì)照者外周血，檢測(cè)血常規(guī)。分別用光學(xué)顯微鏡和透射電鏡觀察患者中性粒細(xì)胞、血小板及其細(xì)胞器的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。根據(jù)NCBI參考序列設(shè)計(jì)PCR擴(kuò)增MYH9蛋白編碼區(qū)的引物，對(duì)MYH9基因序列和突變片段進(jìn)行一代測(cè)序、克隆測(cè)序和酶切實(shí)驗(yàn)，確定突變位點(diǎn)和類(lèi)型。并進(jìn)行線粒體全基因組測(cè)序?qū)ふ壹膊∠嚓P(guān)SNP。最后使用計(jì)算軟件預(yù)測(cè)突變蛋白對(duì)機(jī)體的影響和序列保守性分析。結(jié)果8名家系患者的血常規(guī)檢測(cè)有“巨大血小板、血小板數(shù)量減少和中性粒細(xì)胞含包涵體”的MYH9RD三聯(lián)征，其中一人的血小板數(shù)量在正常值的下限內(nèi)（122109L）?；颊哂衅つw易挫傷、紫癜消退緩慢等癥狀，但臨床表現(xiàn)略有不同。基因測(cè)序結(jié)果表明，家系所有8例患者的MYH9基因C5803DELG雜合缺失，導(dǎo)致移碼突變，造成非肌肉肌球蛋白重鏈ⅡANMMHCⅡA的羧基端非螺旋尾部的蛋白截短，共涉及26個(gè)氨基酸變異（PALA1935PROFS13）。而家系內(nèi)和非家系健康人均無(wú)此突變。透射電鏡結(jié)果顯示，患者的血小板內(nèi)細(xì)胞器含量差異大，其中開(kāi)發(fā)管道數(shù)量與血小板體積成比例增加。PROVEAN軟件預(yù)測(cè)變異蛋白對(duì)機(jī)體有害（SCE367＜25），MUTATIONTASTER計(jì)算表明變異區(qū)域的氨基酸序列在哺乳動(dòng)物中是部分保守，預(yù)測(cè)變異能引起疾病。結(jié)論在有8名患者的家系中，C5803DELG突變與疾病共分離，是該家系患者的致病突變。NMMHCⅡA的異常磷酸化可能是導(dǎo)致MYH9RD患者血小板一直處于激活狀態(tài)的重要原因?；颊叩呐R床表現(xiàn)支持國(guó)際上對(duì)MYH9基因型與表型關(guān)系的研究結(jié)論發(fā)生在NMMHCⅡA蛋白羧基端尾部的突變產(chǎn)生的癥狀較輕。預(yù)計(jì)患者不會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的腎病、白內(nèi)障或耳聾，但不排除老年期發(fā)病的可能。該突變PALA1935PROFS13是一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的突變，國(guó)際上尚未見(jiàn)報(bào)道。

簡(jiǎn)介：學(xué)校代碼10459學(xué)號(hào)或申請(qǐng)?zhí)?01422443676密級(jí)公開(kāi)專(zhuān)業(yè)碩士學(xué)位論文常染色體隱性遺傳早發(fā)性帕金森病2例家系分子遺傳學(xué)研究作者姓名張瑞導(dǎo)師姓名楊偉民教授專(zhuān)業(yè)學(xué)位名稱(chēng)神經(jīng)病學(xué)培養(yǎng)院系第一臨床學(xué)院完成時(shí)間2017年5月原創(chuàng)性聲明創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者日期年月日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者日期年月日

簡(jiǎn)介：分類(lèi)號(hào)UDC密級(jí)編號(hào)角方霜糾大摩博士學(xué)位論文遺傳變異與神經(jīng)母細(xì)胞瘤易感性、預(yù)后關(guān)系的分子流行病學(xué)研究MOLECULAREPIDEMIOLOGICALSTUDYONTHEASSOCIATIONOFGENETICVARIATIONSWITHNEUROBLASTOMASUSCEPTIBILITYANDPROGNOSIS導(dǎo)師姓名專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)培養(yǎng)類(lèi)型論文提交日期張焯榮封志純兒科學(xué)在職博士2017年5月7日Ⅲ9MⅢ1Ⅲ4仆MJ■■_㈣8㈣23ⅢY博士學(xué)位論文遺傳變異與神經(jīng)母細(xì)胞瘤易感性、預(yù)后關(guān)系的分子流行病學(xué)研究背景博士研究生張焯榮指導(dǎo)教師封志純教授摘要神經(jīng)母細(xì)胞瘤NEUROBLASTOMA，NB是嬰幼兒最常見(jiàn)的惡性腫瘤，可發(fā)生在交感神經(jīng)系統(tǒng)的任何部位，預(yù)后極差，且容易遺留慢性健康問(wèn)題，大大降低患者的生活質(zhì)量。NB的病因及發(fā)展過(guò)程極其復(fù)雜，具體的發(fā)病機(jī)制至今未明，因而缺乏有效的預(yù)防和治療手段。既往的5個(gè)主要在歐裔人群中開(kāi)展的全基因組關(guān)聯(lián)研究GENOMEWIDEASSOCIATIONSTUDYGWAS發(fā)現(xiàn)CASCL5、BARDL、LM01、DUSPL2、DDX4、IL31RA、HSDL7812、LIN28B和HACEL基因的23個(gè)單核苷酸多態(tài)性SINGLENUCLEOTIDEPOLYMORPHISM，SNP與NB易感性和預(yù)后相關(guān)，但亞洲范圍內(nèi)的相關(guān)研究尚未見(jiàn)報(bào)道。目的通過(guò)對(duì)NB患者及健康人的23個(gè)SNP基因型差異進(jìn)行分析，了解遺傳變異與NB易感性、預(yù)后的相關(guān)性，為形成針對(duì)中國(guó)漢族人群NB的新型靶向診療方案提供理論依據(jù)。方法

簡(jiǎn)介：第一部分、廣西人群Β珠蛋白基因15個(gè)STR基因座的遺傳多態(tài)性研究目的研究與Β珠蛋白（ΒGLOBIN，HBB）基因緊密連鎖的15個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列SHTTEMREPEAT，STR基因座在廣西人群中的遺傳多態(tài)性，為建立Β地中海貧血胚胎植入前遺傳學(xué)診斷PREIMPLANTATIONGEICDIAGNOSIS，PGD的單體型分析技術(shù)PREIMPLANTATIONGEICHAPLOTYPING，PGH提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法采集廣西地區(qū)150名無(wú)關(guān)個(gè)體的外周靜脈血，提取外周血基因組DNA，通過(guò)熒光PCR技術(shù)擴(kuò)增與Β珠蛋白基因緊密連鎖距離HBB基因＜1MB的15個(gè)STR基因座HBB4506、D11S988、HBB4677、D11S2362、HBB5089、D11S1243、HBB5138、HBB5178、HBB5205、D11S1760、HBB5576、HBB5655、HBB5820、HBB5859、D11S1338），擴(kuò)增產(chǎn)物使用ABI3500DX遺傳分析儀進(jìn)行毛細(xì)管電泳，結(jié)果用GENEMAPER41軟件進(jìn)行分析。最后利用MICROSOFTEXCEL軟件計(jì)算15個(gè)HBBSTR基因座的等位基因頻率分布以及多態(tài)信息量POLYMPHISMINFMATIONCONTENT，PIC等。結(jié)果在這15個(gè)HBBSTR基因座（HBB4506、D11S988、HBB4677、D11S2362、HBB5089、D11S1243、HBB5138、HBB5178、HBB5205、D11S1760、HBB5576、HBB5655、HBB5820、HBB5859、D11S1338上分別檢出18、24、22、11、18、27、13、13、16、23、22、16、17、18和7個(gè)等位基因，等位基因頻率從0003333到0383333不等。這15個(gè)HBBSTR基因座的多態(tài)信息量PIC分別為08457、08983、08931、07592、08698、09046、07940、07925、07708、09102、08583、08467、07438、08366和07704。這15個(gè)基因座的PIC均＞07000，平均值為08329，其中PIC＞08500的HBBSTR基因座有6個(gè)。結(jié)論本研究檢測(cè)的這15個(gè)HBBSTR基因座在廣西人群中的多態(tài)信息量PIC較高，具有高度的遺傳多態(tài)性，在建立Β地中海貧血胚胎植入前遺傳學(xué)診斷PGD的單體型分析PGH技術(shù)中具有較高的應(yīng)用價(jià)值，為后續(xù)工作的開(kāi)展提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。第二部分、Β地中海貧血胚胎植入前遺傳學(xué)診斷中不同診斷方法的比較目的對(duì)Β地貧PGD中兩種遺傳學(xué)診斷方法反向點(diǎn)雜交REVERSEDOTBLOT，RDB結(jié)合STR單體型分析技術(shù)與二代測(cè)序NEXTGENERATIONSEQUENCING，NGS技術(shù)，從診斷時(shí)間、確診率、費(fèi)用等方面進(jìn)行對(duì)比研究，建立最適宜的遺傳學(xué)診斷技術(shù)應(yīng)用于廣西地區(qū)Β地貧PGD。方法選擇雙方均為Β地中海貧血基因突變攜帶者、有PGD指征且同意參加本研究的的夫婦?；颊叻驄D及另外三名家系成員（女方母親、男方母親和男方父親）一同抽取外周靜脈血進(jìn)行15個(gè)STR位點(diǎn)的家系連鎖分析?；颊呓?jīng)過(guò)常規(guī)的藥物促排卵、取卵、取精、卵胞漿內(nèi)單精子注射INTRACYTOPLASMICSPERMINJECTION，ICSI、胚胎培養(yǎng)等程序，將所得胚胎全部進(jìn)行囊胚培養(yǎng)，形成囊胚后，取囊胚期數(shù)個(gè)（58個(gè)）滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞活檢，活檢后即將所有囊胚行玻璃化冷凍。利用多重置換擴(kuò)增MULTIPLEDISPLACEMENTAMPLIFICATION，MDA法對(duì)滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞進(jìn)行全基因組擴(kuò)增WHOLEGENOMEAMPLIFICATION，WGA。MDA擴(kuò)增產(chǎn)物一部分采用反向點(diǎn)雜交RDB結(jié)合15個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列STR位點(diǎn)的單體型分析PGH技術(shù)進(jìn)行遺傳學(xué)診斷（A組）另一部分MDA擴(kuò)增產(chǎn)物采用二代測(cè)序NGS方法進(jìn)行診斷（B組）。比較兩種方法的檢出率、診斷符合率、所需時(shí)間和費(fèi)用等。待診斷結(jié)果出來(lái)后選擇最合適的囊胚進(jìn)行解凍移植。結(jié)果納入本研究的患者獲卵24個(gè)，胚胎13個(gè)，囊胚培養(yǎng)后形成6枚囊胚（囊胚評(píng)分分別為4BB，4BC，3CC，3CC，3BC，3CC），每個(gè)囊胚取滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞活檢，6例樣本MDA法擴(kuò)增均擴(kuò)增成功，擴(kuò)增成功率100％。A組中，囊胚1地貧基因型診斷結(jié)果為Β28ΒCD4142囊胚2地貧基因型診斷結(jié)果為ΒCD4142ΒN囊胚3地貧基因型診斷結(jié)果為ΒNΒN囊胚4的地貧基因型診斷結(jié)果為Β28ΒNΒN囊胚5和6的地貧基因型診斷結(jié)果均為Β28ΒN。B組的地貧基因型診斷結(jié)果與A組完全一致，B組同時(shí)對(duì)囊胚26進(jìn)行染色體拷貝數(shù)檢測(cè)，診斷出囊胚2為整倍體，囊胚36均為非整倍體。A組所需診斷時(shí)間為23天，結(jié)果分析所需時(shí)間約為1個(gè)工作日B組所需診斷時(shí)間為23天，結(jié)果外送嘉寶仁和公司分析，所需時(shí)間為7個(gè)工作日。A組費(fèi)用為2000元囊胚，而B(niǎo)組費(fèi)用為3500元囊胚。最后選擇囊胚2解凍移植，遺憾的是未獲得臨床妊娠。結(jié)論與二代測(cè)序NGS技術(shù)相比，反向點(diǎn)雜交結(jié)合STR單體型分析技術(shù)也能在Β地中海貧血PGD中有效、準(zhǔn)確地診斷出植入前囊胚的地貧基因型，能夠應(yīng)用于Β地貧PGD臨床。雖然目前二代測(cè)序價(jià)格昂貴、結(jié)果分析人員要求高，臨床推廣應(yīng)用受限，但NGS是PGD遺傳學(xué)診斷技術(shù)的發(fā)展方向和未來(lái)趨勢(shì)。然而考慮到目前各方面條件的限制以及在廣西地區(qū)開(kāi)展Β地貧PGD的急切需求，RDB結(jié)合15個(gè)STR位點(diǎn)單體型分析的診斷方法更加適合目前的廣西地區(qū)Β地貧PGD，值得推廣應(yīng)用。第三部分、MDA結(jié)合RDB及STR單體型分析在Β地貧PGD中的臨床應(yīng)用研究目的研究多重置換擴(kuò)增MDA結(jié)合反向點(diǎn)雜交RDB及短串聯(lián)重復(fù)序列STR單體型分析技術(shù)在Β地貧PGD中的臨床應(yīng)用。方法納入8對(duì)雙方均為Β地中海貧血基因突變攜帶者且要求進(jìn)行Β地貧PGD治療的夫婦。攜帶者夫婦及其雙方父母（每個(gè)家系一共6名成員）均抽取外周靜脈血進(jìn)行15個(gè)STR位點(diǎn)的家系連鎖分析?；颊呓?jīng)過(guò)常規(guī)的藥物促排卵、取卵、取精、卵胞漿內(nèi)單精子注射ICSI、胚胎培養(yǎng)等程序，將所得胚胎全部進(jìn)行囊胚培養(yǎng)，形成囊胚后，取囊胚期數(shù)個(gè)（58個(gè)）滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞活檢，活檢后即將所有囊胚進(jìn)行玻璃化冷凍。利用多重置換擴(kuò)增MDA法對(duì)取得的滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞進(jìn)行全基因組擴(kuò)增WGA。MDA擴(kuò)增產(chǎn)物采用反向點(diǎn)雜交RDB結(jié)合15個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列STR位點(diǎn)的單體型分析PGH技術(shù)進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。待診斷結(jié)果出來(lái)后，結(jié)合致病基因遺傳學(xué)診斷結(jié)果和囊胚評(píng)分，選擇最佳囊胚進(jìn)行解凍移植，妊娠后孕1822周通過(guò)羊水產(chǎn)前診斷進(jìn)一步驗(yàn)證PGD診斷結(jié)果。結(jié)果這8對(duì)夫婦，Β地中海貧血基因突變類(lèi)型分別為CD4142N、CD17N、28N或IVSⅡ654N。每個(gè)家系6名成員檢測(cè)15個(gè)STR位點(diǎn)后結(jié)果顯示每個(gè)家系均有7個(gè)或以上（HBB基因上游或下游均有2個(gè)以上）的STR位點(diǎn)可以提供診斷信息，單體型構(gòu)建成功?；颊呓?jīng)過(guò)常規(guī)藥物促排卵，取卵、卵胞漿內(nèi)單精子注射ICSI后共獲得147枚胚胎，形成86枚囊胚，囊胚形成率5850％。其中82枚囊胚擴(kuò)增成功，擴(kuò)增成功為9535％。80枚囊胚獲得了明確診斷，其中24枚囊胚為正常純合子38枚囊胚診斷為雜合子18枚囊胚為不能移植的異常純合子或雙重雜合子。8例患者中一共4例患者進(jìn)行了囊胚解凍移植（例1、例2、例3和例6），均為單囊胚移植。其中3例（例1、例2和例3）獲得妊娠，1例（例6）未妊娠。妊娠率為75％34。例1和例2患者移植正常純合子囊胚（基因型ΒNΒN），中孕期羊水產(chǎn)前診斷結(jié)果與PGD診斷結(jié)果相符。例3患者移植雜合子囊胚基因型為ΒCD4142ΒN，移植后獲得妊娠，但目前還未行產(chǎn)前診斷驗(yàn)證PGD診斷結(jié)果。結(jié)論本研究建立的Β地貧PGD方法即經(jīng)多重置換擴(kuò)增MDA后，反向點(diǎn)雜交RDB結(jié)合短串聯(lián)重復(fù)序列STR單體型連鎖分析，經(jīng)驗(yàn)證有效、準(zhǔn)確，可以在廣西地區(qū)Β地貧PGD臨床中推廣應(yīng)用。我們期待著更大樣本量的研究證實(shí)。

簡(jiǎn)介：LNNLNIILLLLLLLLLLLLLLLLLLLLL刪L鬯3268894分類(lèi)號(hào)81塹2密級(jí)坌玨中文題目英文題目單位代碼學(xué)號(hào)翁中固蟹紳太零10159201421088碩士學(xué)位論文臨床醫(yī)學(xué)碩士學(xué)術(shù)學(xué)位MIR27B在胃癌中的生物學(xué)功能及袁遺傳學(xué)調(diào)控機(jī)制研究TLLEBIOLOGICALFUNCTIONOFMIR一27BINGASTRICCANCERANDTHEEPIGENETICALLYREGULATEANDCONTROLMECHANISM論文作者塹量指導(dǎo)教師戴圣叢墼撞學(xué)科專(zhuān)業(yè)盟疊主完成時(shí)間Q】Z生2旦ILLLLLLLLLLLLTLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLLRLY3268894中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明本論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果，論文中除加以標(biāo)注的內(nèi)容外，不包含其他人或機(jī)構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含本人為獲得其他學(xué)位而使用過(guò)的成果。對(duì)本研究提供貢獻(xiàn)的其他個(gè)人和集體均已在文中進(jìn)行了明確的說(shuō)明并表示謝意。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。論文作者簽名芻尹釤日期少L帝七月，日中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交學(xué)位論文的原件、復(fù)印件和電子版，允許學(xué)位論文被查閱和借閱。本人授權(quán)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密，在年后解密適用本授權(quán)書(shū)。保密請(qǐng)?jiān)诶ㄌ?hào)內(nèi)劃“√’，論文日期指導(dǎo)教師簽名墨呈陟∥＼一一日期2稗F月廠目