卡培他濱及其片劑的產(chǎn)業(yè)化研究.pdf

1、近幾年，鑒于我國(guó)目前的醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)狀況，國(guó)家出臺(tái)了很多行業(yè)政策，以鼓勵(lì)已上市藥物大品種的技術(shù)改造，尤其是對(duì)已經(jīng)上市“重磅炸彈”藥物的進(jìn)行產(chǎn)業(yè)化研究;為了滿(mǎn)足臨床的需求，建立擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的合成技術(shù)和制備工藝，使國(guó)產(chǎn)化的產(chǎn)品達(dá)到國(guó)際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而替代進(jìn)口，減輕患者家庭和國(guó)家醫(yī)療費(fèi)用的負(fù)擔(dān)，以“國(guó)家十二五重大新藥創(chuàng)制專(zhuān)項(xiàng)”為依托，本課題進(jìn)行了卡培他濱及其片劑的產(chǎn)業(yè)化研究。
　　根據(jù)國(guó)家最新的藥品技術(shù)及產(chǎn)品質(zhì)量一致性評(píng)價(jià)要求，對(duì)產(chǎn)品雜質(zhì)、

2、體內(nèi)外釋放行為一致性的要求越來(lái)越嚴(yán)格，提出“雜質(zhì)譜分析”、“一致性評(píng)價(jià)”的概念，對(duì)于雜質(zhì)含量在0.1％以上的雜質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定及毒性評(píng)價(jià)，因此雜質(zhì)控制及產(chǎn)品質(zhì)量一致性成為制約產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵因素。為實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，需要解決下面兩個(gè)問(wèn)題:1.原料:產(chǎn)品純度，雜質(zhì)譜分析，雜質(zhì)控制;2.制劑:產(chǎn)品穩(wěn)定性，體內(nèi)外釋放行為的一致性。
　　在現(xiàn)有合成技術(shù)中，卡培他濱原料存在工業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模較小，環(huán)境污染，成本高，純度低，含有雜質(zhì)數(shù)量較多的缺點(diǎn)（其中美

3、國(guó)FDA標(biāo)準(zhǔn)是含有9個(gè)已知結(jié)構(gòu)雜質(zhì)和未知雜質(zhì)，其雜質(zhì)總含量為1.5％）。
　　本課題采用QbD的理念與方法，確定了30kg/批規(guī)模的中試生產(chǎn)放大工業(yè)化生產(chǎn)工藝以及符合GMP條件的工業(yè)化生產(chǎn)設(shè)備的選型、工藝流程設(shè)計(jì)，生產(chǎn)出高純度、高質(zhì)量的卡培他濱原料藥;確定了10萬(wàn)片/批規(guī)模的中試生產(chǎn)放大卡培他濱片的處方及工業(yè)化生產(chǎn)工藝及符合GMP條件的工業(yè)化生產(chǎn)設(shè)備的選型、工藝流程設(shè)計(jì)，制備出了穩(wěn)定性良好的卡培他濱片;首次建立了卡培他濱片體內(nèi)外相

4、關(guān)性的分析方法，通過(guò)體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)了卡培他濱片的質(zhì)量穩(wěn)定性、均一性、一致性;建立了一套符合國(guó)際GMP標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量管理體系，使生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到國(guó)際水平。在合成工藝及片劑的穩(wěn)定性上均獲得了重大突破。課題具體研究?jī)?nèi)容包括:
　　1.基于QbD理念的卡培他濱生產(chǎn)工藝改進(jìn)及質(zhì)量控制
　　目的:確定卡培他濱的合成工藝路線(xiàn)和工業(yè)化生產(chǎn)工藝，建立卡培他濱原料藥的質(zhì)量控制方法和限度。
　　方法:在卡培他濱原料藥合成工藝路線(xiàn)研究開(kāi)發(fā)過(guò)程中

5、，應(yīng)用QbD的思路來(lái)設(shè)計(jì)合成路線(xiàn)和生產(chǎn)工藝，首先界定目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量概況(QTPP)，確定其關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQAs);對(duì)每一個(gè)單元操作，進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，利用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(DOE)方法對(duì)識(shí)別出的高風(fēng)險(xiǎn)變量進(jìn)行研究，以確定關(guān)鍵物料屬性(CMAs)和關(guān)鍵工藝參數(shù)(CPPs)。綜合考慮原料藥合成工藝路線(xiàn)的反應(yīng)條件、環(huán)保情況、產(chǎn)品精制與純化的可行性，并進(jìn)行了30kg/批規(guī)模的中試生產(chǎn)放大以及符合GMP條件的工業(yè)化生產(chǎn)設(shè)備的選型、工藝流程設(shè)計(jì)。以雜質(zhì)含量（

6、雜質(zhì)含量達(dá)到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)）、成品收率(60-75％)、工藝路線(xiàn)適合于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)為評(píng)價(jià)指標(biāo)。
　　結(jié)果:以5-脫氧-1，2，3-三-O-乙?；?β-D-呋喃核糖和硅醚化的5-氟胞嘧啶為起始原料，經(jīng)縮合、酯化、乙酰解三步反應(yīng)制備卡培他濱，其中縮合反應(yīng)中采用三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯(TMSOTF)替代重金屬試劑四氯化錫作為糖苷化反應(yīng)的縮合劑，反應(yīng)量為1∶1.0～1.5，優(yōu)選1∶1.2;反應(yīng)溫度優(yōu)選室溫20～25℃，反應(yīng)條件溫和，TLC監(jiān)測(cè)反

7、應(yīng)進(jìn)行完全后(約反應(yīng)15-16h)，以飽和碳酸氫鈉溶液淬滅反應(yīng)，可以減少副反應(yīng)的發(fā)生，以異丙醇對(duì)所得油狀粗產(chǎn)品進(jìn)行一次重結(jié)晶，即可得到白色中間體Ⅰ，HPLC檢測(cè)純度99％以上，收率83％～86％。酯化反應(yīng)中采用中間體Ⅰ與氯甲酸正戊酯發(fā)生N4位上的酯化反應(yīng)，反應(yīng)量1∶1.4～1.8，優(yōu)選1∶1.4;采用無(wú)機(jī)堿K2CO3代替有機(jī)堿吡啶作為縛酸劑，反應(yīng)量為1∶1.0～1.3，優(yōu)選1∶1.0;二甲氨基吡啶作為催化劑加速反應(yīng)歷程，優(yōu)選反應(yīng)量1∶0

8、.1～0.2;反應(yīng)溫度冰浴(0～5℃)下，TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)進(jìn)行完全后(約反應(yīng)45～60min)，以0.1mol/L稀鹽酸洗滌，以乙酸乙酯和正己烷的混合溶劑進(jìn)行一次精制，即可得到白色中間體Ⅱ，HPLC檢測(cè)純度99％以上，收率85％～90％。乙酰解反應(yīng)中，中間體Ⅱ在氫氧化鉀/15β-羥基介芬胺(5∶1)體系中脫乙酰基，反應(yīng)量為1∶2.0～2.5，優(yōu)選1∶2.0，反應(yīng)溫度為5～15℃，反應(yīng)時(shí)間約45～60min，以二氯甲烷萃取，用飽和碳酸氫鈉水

9、溶液、水洗滌，用乙酸乙酯重結(jié)晶得到卡培他濱，HPLC檢測(cè)純度為99.8％，收率為85％～90％。
　　結(jié)論:確定卡培他濱的合成工藝路線(xiàn)和工業(yè)化生產(chǎn)工藝，建立了一套符合國(guó)際GMP標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量管理要求，以及起始原料和中間體雜質(zhì)檢測(cè)方法，可實(shí)現(xiàn)過(guò)程控制，確保產(chǎn)品質(zhì)量。建立卡培他濱原料藥的質(zhì)量控制方法和限度。制備的卡培他濱純度高達(dá)99.8％，總收率69.6％，雜質(zhì)含量小，除USP39版中已知雜質(zhì)A、B、C外均未檢出其它雜質(zhì)，其雜質(zhì)含量遠(yuǎn)小于

10、USP中本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的雜質(zhì)含量與數(shù)量（9個(gè)已知雜質(zhì)）。
　　2.基于QbD理念的卡培他濱片生產(chǎn)工藝改進(jìn)及質(zhì)量控制
　　目的:確定卡培他濱片的處方組成和工業(yè)化生產(chǎn)工藝，建立卡培他濱片的質(zhì)量控制方法和限度。
　　方法:應(yīng)用QbD的思路來(lái)研發(fā)處方工藝，確保產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控。根據(jù)原料在組方中含量較高、原料粘性大流動(dòng)性不好，考慮到生產(chǎn)成本，采用傳統(tǒng)濕法制粒工藝進(jìn)行壓片，根據(jù)原料的穩(wěn)定性，容易發(fā)生水解降解反應(yīng)，采用傳統(tǒng)濕

11、法制粒工藝，粘合劑采用50％的藥用乙醇，控制片中的水分，從而控制降解雜質(zhì)的產(chǎn)生，對(duì)工藝參數(shù)進(jìn)行篩選，提高產(chǎn)品的穩(wěn)定性，保證釋放行為均一性。對(duì)處方中原料的粒度、粘合劑、稀釋劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑的用量及種類(lèi)進(jìn)行篩選，采用質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)顆粒流動(dòng)性、休止角、崩解時(shí)限、可壓性、含量均勻性、雜質(zhì)、溶出行為與原研產(chǎn)品一致性等進(jìn)行評(píng)價(jià)控制。制定商業(yè)化生產(chǎn)工藝（保證工藝受控）及生產(chǎn)的控制策略。并進(jìn)行了10萬(wàn)片/批規(guī)模的中試生產(chǎn)放大以及符合GMP條件的工業(yè)化生

12、產(chǎn)設(shè)備的選型、工藝流程設(shè)計(jì)。工藝路線(xiàn)適合于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
　　結(jié)果:制劑選用50％的藥用乙醇為粘合劑采用濕法制粒工藝，選用無(wú)水乳糖和微晶纖維素作為主要稀釋劑，利用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選處方，最后選定的處方大大降低了三個(gè)降解產(chǎn)物的量，更好地保證了藥品的穩(wěn)定性，體外溶出試驗(yàn)表明，溶出曲線(xiàn)與參比制劑相似，f2達(dá)70％以上，為體內(nèi)的生物等效提供了良好的基礎(chǔ)保證。配方如下:卡培他濱0.5g、乳糖54mg、微晶纖維素28mg、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉20mg

13、、2％羥丙甲纖維素乙醇溶液20ml、二氧化硅6mg、硬脂酸鎂3mg、歐巴代包衣粉3％。
　　結(jié)論:確定卡培他濱片的工業(yè)化生產(chǎn)工藝，提升了產(chǎn)品的穩(wěn)定性，減少了降解雜質(zhì)的產(chǎn)生;建立了中間體檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)了過(guò)程控制，確保了產(chǎn)品的質(zhì)量;建立卡培他濱片的質(zhì)量控制方法和限度;建立了一套符合國(guó)際GMP標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量管理要求;終產(chǎn)品雜質(zhì)含量小于參比制劑，體外釋放行為與參比制劑一致（f2因子＞70），產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到國(guó)際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。
　　3.卡培他

14、濱片的穩(wěn)定性研究
　　目的:考察卡培他濱片的穩(wěn)定性情況，確定產(chǎn)品工藝的可行性，制定上市后的貯存條件及有效期。
　　方法:根據(jù)現(xiàn)行的《原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則》，進(jìn)行影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)的穩(wěn)定性考察，考察項(xiàng)目為性狀、溶出度、有關(guān)物質(zhì)和含量。
　　結(jié)果:在光照、高濕RH92.5％及高溫60℃條件放置10天后，本品性狀、溶出度、有關(guān)物質(zhì)及含量均未發(fā)生明顯變化，本品經(jīng)加速試驗(yàn)6個(gè)月和長(zhǎng)期試驗(yàn)18個(gè)月考察可

15、知，與0月相比較，各項(xiàng)考察指標(biāo)均未發(fā)生顯著變化，各項(xiàng)指標(biāo)均符合本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。
　　結(jié)論:表明本品對(duì)光照、高濕RH92.5％及高溫60℃相對(duì)穩(wěn)定。說(shuō)明本品在該包裝條件下穩(wěn)定性較好。長(zhǎng)期試驗(yàn)繼續(xù)進(jìn)行，以確定本品的最終有效期及貯藏條件。有效期暫定為24個(gè)月，貯存條件為密閉保存。
　　4.卡培他濱片體內(nèi)外相關(guān)性研究
　　目的:研究卡培他濱片（自制品）與卡培他濱片(Xeloda(@))（參比品）在比格犬體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，計(jì)算卡

16、培他濱片的相對(duì)生物利用度及卡培他濱片體外釋放與體內(nèi)吸收的相關(guān)性，為工藝優(yōu)化提供依據(jù)。
　　方法:健康比格犬12只，分別給予自制品和參比品各1片（規(guī)格0.5g），給藥后0～360min內(nèi)靜脈取血。用高效液相色譜法測(cè)定血漿中卡培他濱濃度，房室模型計(jì)算其主要的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，用Wanger-Nelson法對(duì)卡培他濱片在犬體內(nèi)外相關(guān)性進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果:自制品與參比品的半衰期(t1/2)分別為(1.06±0.52)和(1.08±0.5

17、4)h，達(dá)峰時(shí)間(tmax)分別為(1.0±0.52)和(1.0±0.41)h，峰濃度(Cmax)分別為(4.01±0.11)和(3.89±0.09)μg·L-1，濃度-時(shí)間曲線(xiàn)下面積(AUC0-t)分別為(9.04±1.36)和(9.12±1.26)μg·L-1·h，AUC0-∞分別為(9.89±1.35)和(9.96±2.01)μg·L-1·h。AUC0-6h可信限在0.80～1.25等效范圍內(nèi)。體內(nèi)吸收分?jǐn)?shù)fa與體外水中釋放速率f