根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的菜心(brassicacampestrisl.subsp.chinensismakinovar.parachinensistsenetlee)遺傳轉(zhuǎn)化與優(yōu)化研究

1、河南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的菜心（Brassica campestris L. Subsp.Chinensis Makino var. parachinensis Tsenet Lee）遺傳轉(zhuǎn)化與優(yōu)化研究姓名：王銀娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：食品科學(xué)指導(dǎo)教師：高向陽；闞云超201205S t u d y o n G e n e t i c T r a n s f o r m a t i o n a n d O p t i m

2、i z a t i o n o f B r a s s i c ac a m p e s t r i s L ．S u b s p ．c h i n e n s i sM a k i n o v a r ．p a r a c h i n e n s i sT s e n e t L e em e d i a t e db y A g r o b a c t e r i u m t u m e f a c i e n sS u p e r

3、 v i s o r ：P r o f ．G a oX i a n g y a n g ；V i c e P r o f e s s o r K a n Y u n c h a oM a s t e r ( P h ．D ) C a n d i d a t e ：W a n gY i n j u a nA b s t r a c t ：I n t h i s e x p e r i m e n t ，t h e s e e d s o

4、fY o u q i n g s i j i u B r a s s i c a c a m p e s t r i sL ．S u b s p ．c h i n e n s i sM a k i n o v a r ．p a r a c h i n e n s i sT s e n e tL e e w e r eu s e da sr a w m a t e r i a l ．T h e h i g h f r e q u e n

5、c y r e g e n e r a t i o n s y s t e m o f p e t i o l e —c o t y l e d o n e x p l a n t s f r o mY o u q i n g s i j i u B r a s s i c a c a m p e s t r i s 三．S u b s p ．c h i n e n s i s M a k i n o v a t ．p a r a c

6、h i n e n s i sT s e n e t L e e ，g e n e t i c t r a n s f o r m a t i o n s y s t e m a n d o p t i m i z a t i o n o f C h i n e s e c a b b a g em e d i a t e d b y A g r o b a c t e r i u m t u m e f a c i e n s w a

7、 s s y s t e m a t i c a l l y d i s c u s s e d ．T h e( E ) 一B ．f a m e s e n e g e n e w a s t r a n s f e r r e d i n t o t h e Y o u q i n g s i j i u B r a s s i c a c a m p e s t r i sL ．S u b s p ． c h i n e n s i

8、 s M a k i n o v 口r p a r a c h i n e n s i s T s e n e t L e es u c c e s s f u l l y a n dt h et r a n s g e n i c p l a n th a db e e n i n i t i a l l yi d e n t i f i e dw i t h P C R ．F a c t o r se f f e c t i n g

9、 s h o o td i f f e r e n t i a t i o no fe x p l a n t sf r o mY o u q i n g s i j i u B r a s s i c ac a m p e s t r i s L ．S u b s p ．c h i n e n s i sM a k i n ov a t ' ．p a r a c h i n e n s i s T s e n e tL e e

10、r e g e n e r a t i o ns y s t e mw e r es t u d i e d r e s p e c t i v e l y ，w h i c hi n c l u d e ds u c h a st h ec o n c e n t r a t i o no f A g N 0 3 ，t h e s u i t a b l e c o n c e n t r a t i o n o fp l a n t

11、 g r o w t hh o r m o n e ，t h e r a t i o o fh o r m o n e s a n de x p l a n t s s e e d l i n g a g e ．Ah i g h l y e f f e c t i v e r e g e n e r a t i o n s y s t e mo fp e t i o l ‘c o t y l e d o ne x p l a n t s

12、 f r o mY o u q i n g s i j i u B r a s s i c a c a m p e s t r i s ￡．S u b s p ．c h i n e n s i s M a k i n o v a r ．p a r a c h i n e n s i s T s e n e t L e e w a s e s t a b l i s h e d a sf o l l o w s ：I n u l t r

13、a ．c l e a n w o r kb e n c h ，w i t h g a u z ew r a p p e ds e e d s ，w e r e s o a k e d i n 7 0 ％e m a l l 0 1f o r4 5s e c o n d s ，w a s h e df o r3 t i m e sw i t hs t e r i l i z e dw a t e r ，s u r f a c e —s t

14、e r i l i z e di n0 ．1 ％m e r c u r i c c h l o r i d e s o l u t i o nf o r 8 - 1 0m i n u t e sa n d k e e p i n g s t i r r i n g t h e g a u z ed u r i n g t h a t t i m e ，w a s h e d f o r4 - 5t i m e s w i t h s t

15、 e r i l i z e d w a t e r ，s t e r i l e f i l t e r p a p e rs u c k i n g t h es e e d ss u r f a c er e s i d u a lm o i s t u r e ，t h e ns o w e do n1 ／2 M Sb a s i cm e d i u mi nc u l t u r eb o t t l e ，a b o u

16、t 10 0s e e d sp e rb o t t l e a n dt h e b o t t l e w e r ep u t i np l a n t t i s s u ec u l t u r er o o m ．u n d e rt h ec u l t u r ec o n d i t i o no fl i g h ti n t e n s i t y16 0 0 - 2 0 0 0 1 x ，( 2 5 + 1 )

17、 。C ，16 hl i g h t ／8 h d a r kp h o t o p e r i o d ，a f t e r3 - 7d a y st og e ts e e d l i n g s ．T h ep e t i o l 。c o t y l e d o ne x p l a n t sw a s e x c i s e dn e a rt h eg r o w i n gp o i n g tf r o m5d a y

18、 ss e e d l i n g s ，a n dc u l t u r e du n d e r t h el i g h to nm o d i f i e dh a l f o f M S m e d i u m ：l ／2 N H 4 + M S + 3 0 9 ／L s u g r o s e + 8 9 ／La g a r + 4 m g ／L 6 - B A + l m g ／L N A A + 7 ．5 m g m A