根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)產(chǎn)葉黃素小球藻遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、　　葉黃素是一種含氧類胡蘿卜素，具有抗氧化活性，能夠預(yù)防癌癥、心血管疾病和年齡相關(guān)黃斑變性等疾病。小球藻中含有豐富的葉黃素，且具有生長(zhǎng)速度快、可異養(yǎng)培養(yǎng)、易于進(jìn)行規(guī)?；囵B(yǎng)和藻種改良的優(yōu)點(diǎn)，利用小球藻合成葉黃素越來越受人們的關(guān)注。
　　本研究以普通小球藻(Chlorella vulgaris)為轉(zhuǎn)化材料，建立了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)普通小球藻的遺傳轉(zhuǎn)化體系，分別將IPP異構(gòu)酶基因(idi)、透明顫菌血紅蛋白基因(vgb)和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)酶基

2、因(Glut1)轉(zhuǎn)入普通小球藻中。具體研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下：
　　1、成功構(gòu)建了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)普通小球藻的遺傳轉(zhuǎn)化體系。利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法，將pCAMBIA2301質(zhì)粒的T-DNA區(qū)轉(zhuǎn)入普通小球藻，以G418抗性基因(NPTⅡ)作為篩選標(biāo)記，篩選出陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子。PCR驗(yàn)證結(jié)果表明NPTⅡ基因已經(jīng)整合到普通小球藻基因組中。RT-PCR驗(yàn)證結(jié)果表明NPTⅡ基因在普通小球藻細(xì)胞成功轉(zhuǎn)錄。
　　2、成功介導(dǎo)IPP異構(gòu)酶基因

3、(idi)轉(zhuǎn)化普通小球藻。利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法，將idi基因轉(zhuǎn)入普通小球藻。結(jié)果表明大部分轉(zhuǎn)化子的生物量與野生型相似；轉(zhuǎn)化子的葉黃素含量與野生型相比提高了 30.95%；轉(zhuǎn)化子的葉黃素產(chǎn)量和野生型相比提高了36.77%。
　　3、成功介導(dǎo)透明顫菌血紅蛋白基因(vgb)轉(zhuǎn)化普通小球藻。利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法，將vgb基因轉(zhuǎn)入普通小球藻。結(jié)果表明轉(zhuǎn)化子的生物量和野生型相比提高了 38.81%；葉黃素含量與野生型相比提高