甜瓜植株再生和根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、甜瓜（Cucumis melo L.）是一種重要的蔬菜作物，營(yíng)養(yǎng)豐富，瓜味甜美，原產(chǎn)熱帶，我國(guó)各地普遍栽培。轉(zhuǎn)基因操作是開(kāi)展過(guò)量表達(dá)、RNAi等基因功能研究的基礎(chǔ)。為此，本試驗(yàn)以甜瓜子葉為材料，獲得了穩(wěn)定的甜瓜再生體系，并對(duì)其由根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下:
　　1、甜瓜再生體系的建立:通過(guò)對(duì)種子發(fā)芽培養(yǎng)基、子葉誘芽培養(yǎng)基、苗齡、伸長(zhǎng)培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基及馴化基質(zhì)的研究，得出了甜瓜以子葉為外植體的最佳再生體系:去

2、除種皮后置于1/2MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)最適于種子發(fā)芽，最佳的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L6-芐基腺嘌呤(6-BA)，最適苗齡為4-5天，約28天后，再生芽轉(zhuǎn)入最佳伸長(zhǎng)培養(yǎng)基(MS+0.05mg/L6-BA+0.2 mg/L赤霉素(GA3))中培養(yǎng)，約14天后，將其轉(zhuǎn)入最佳生根培養(yǎng)基(1/2MS+0.1 mg/L吲哚丁酸(IBA))中進(jìn)行生根培養(yǎng)，約20天后，再生植株開(kāi)始馴化，發(fā)現(xiàn)商品化基質(zhì)（購(gòu)于鎮(zhèn)江興農(nóng)有機(jī)肥有限公司的蔬菜育苗基質(zhì)）

3、優(yōu)于混合基質(zhì)（草炭∶蛭石∶珍珠巖=2∶1∶1）。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，整個(gè)再生過(guò)程需要62天左右。
　　2、甜瓜子葉轉(zhuǎn)化體系的建立:將苗齡5天子葉在上述最佳誘芽培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)1天（或苗齡4天子葉預(yù)培養(yǎng)2天），以LBA4404（含質(zhì)粒pCAMBIA2301）菌液侵染后黑暗條件下共培養(yǎng)3天，轉(zhuǎn)入選擇培養(yǎng)基(最佳誘芽培養(yǎng)基+100 mg/L卡那霉素(Kan)+500 mg/L頭孢霉素(Cef))在16小時(shí)光周期、27℃條件下培養(yǎng)，25天左右將抗