農(nóng)桿菌介導(dǎo)棉花遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)phyA植株的獲得.pdf

1、本研究以?xún)?yōu)良的陸地棉品種冀無(wú)2031、中521和農(nóng)大94.7為受體材料，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，將含有根特異性表達(dá)啟動(dòng)子的phyA基因轉(zhuǎn)入供試品種的下胚軸中，利用正交設(shè)計(jì)方法優(yōu)化了農(nóng)桿菌侵染棉花下胚軸的轉(zhuǎn)化條件，并獲得抗性愈傷組織;將phyA基因?qū)腌?12和珂201的胚性愈傷組織中.獲得了經(jīng)PCR檢測(cè)的轉(zhuǎn)基因植株；以珂312、中521和農(nóng)大94-7的莖尖分生組織為受體，獲得了含phyA基因的T2代植株，進(jìn)一步對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的后代進(jìn)行根系植

2、酸酶活性分析，為棉花現(xiàn)代分子育種增添新的內(nèi)容和新的種質(zhì)材料，同時(shí)為農(nóng)作物有效利用土壤有機(jī)磷資源開(kāi)辟一條經(jīng)濟(jì)有效的途徑。主要研究結(jié)果如下: 1.通過(guò)正交設(shè)計(jì)方法，研究了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的棉花下胚軸遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中菌液濃度、侵染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間和共培養(yǎng)溫度對(duì)抗性愈傷轉(zhuǎn)化效率的影響。結(jié)果表明，四個(gè)因素均對(duì)抗性愈傷的誘導(dǎo)率有極顯著影響，其誘導(dǎo)效應(yīng)依次是共培養(yǎng)溫度>菌液OD值>侵染時(shí)間>共培養(yǎng)時(shí)間。按照正交設(shè)計(jì)的原則，最終得到農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化棉花下

3、胚軸的最佳條件是:菌液OD值為0.3，侵染15min，24℃共培養(yǎng)24h。研究了卡那霉素(Km)對(duì)棉花愈傷組織誘導(dǎo)和生長(zhǎng)的影響，結(jié)果表明，不同的品種對(duì)Km的敏感性不同，中521愈傷組織的篩選壓為150mg/L，冀無(wú)2031和農(nóng)大94-7愈傷組織的篩選壓為100mg/L。 2.利用優(yōu)化的條件，以珂312、中521和農(nóng)大94-7的莖尖分生組織為受體，獲得了含phyA基因后代植株，Southern雜交證實(shí)外源基因已整合到棉花基因組中。