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1、西南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文農(nóng)桿菌介導(dǎo)棉花胚性愈傷轉(zhuǎn)化體系的建立及轉(zhuǎn)AFPSPCEMA基因棉花的獲得姓名:魯秀敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專(zhuān)業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:裴炎2003.5.1transgeniccottonplantsInthepresentmethod,cottonembryogenicculturesareusedasanidealtargetmaterialforAgrobaaeriummediatedtransforma
2、tionMostoftheKmresistantandGUSpositiveembryogenicculturesregeneratedontheselectionmediumhavetheabilitytodevelopintotransgenicplants,whichincreasingthetransformationefficiencyThestepofinducingtransgenicembryogeniccallus,w
3、hichisapivotalstepintheregenerationoftransgenicplants,iselimitedandtherebytheperiodofregeneratingtransgenicplantsreducesatleast3qmonthsWeintroducedafpspCEMAgeneintothecottongenomewiththeimprovedtransformationsystemThemai
4、nresultsareasfollows:1DevelopmentofefficientAgrobacteriummediatedtransformationsystemofcottonembryogenicculturesThegus/ntrongenewasusedinexperimentstostudythefactorsinfluencingtransformationefficiencybytransientexpressio
5、nAnefficientAgrobacteriummediatedtransformationsystemofcottonembryoganiccultureswasdevelopedTheresearchindicatedthat100I_tmoi/Lacetosyringone(AS)suppliedintheinoculationandcocultivationmediumincreasedthetransientexpressi
6、onefficiencygreatlyforallthe3Agrobaeterinmtumefaeiensstrainsinvestigated(LBA4404,EHAl01andEHAl05)ThesupervimlentstrainEHAl01gavethehighesttransientefficiencyinthepresenceof100Irmol/LASornot,Themaximumtransientexpressionf
7、requencywasobtainedwhenembryogenicculturescocultivedwithAgrobacteriuratumefaciensstrainEHAl01for4daysThecotyledonembryowaseasilyinfectedbyAgrobacteriuratumefaciens2Stabletransformationofinterestgeneandregenerationoftrans
8、genicplantsAfteroptimizingthefactorsinfluencedtransformationfrequencyinterestgenewasintroducedintothecottongenomewithAgrobacteriumOtmefaciensstrainEHAl01inthepresenceof100mol/LASFollowingco—cultivation,theembryogeniccall
9、uswastransferredontoselectionmediumforselectingtransformedcellsAfter7to8weeks,kanamycinresistantculturesformedOiltheselectionmediumandwereverifiedtotransgenicceilsbyGUShistochemicalassayGUSpositivefrequencywerevariedgrea
10、tlyfrom20%90%withdifferentrepetitionAgreatdealofembryosproducedaftertheKmresistantandGUSpositiveembryogeniccallusculturedinliquidMSBfortwoweeksThedevelopedembryosweretransferredtoembryoelongatemediumforpromotingthemelong
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