農(nóng)桿菌介導(dǎo)的柑橘遺傳轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)基因植株抗性鑒定.pdf

1、柑橘細(xì)菌性潰瘍病(Citrusbacterialcankerdisease，CBCD)是一種國(guó)內(nèi)外檢疫性病害，嚴(yán)重制約著柑橘產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此，創(chuàng)制抗病品種是解決潰瘍病危害的一個(gè)重要途徑。本研究通過(guò)根癌農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化，將pthA基因和Xa27基因轉(zhuǎn)化潰瘍病敏感類(lèi)型檸檬（Citrus.LemonL.）中，獲得轉(zhuǎn)基因植株，并對(duì)轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行鑒定和接種分析。主要結(jié)果如下:
　　1、通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的上胚軸轉(zhuǎn)化方法，pthA基因轉(zhuǎn)化約500個(gè)外植

2、體，鑒定57株檸檬，其中陽(yáng)性植株45株，陽(yáng)性率為78.9％。Xa27基因轉(zhuǎn)化約1000個(gè)外植體，鑒定29株檸檬，其中陽(yáng)性植株10株，陽(yáng)性率為34.5％。
　　2、通過(guò)基因表達(dá)分析，篩選pthA轉(zhuǎn)化的拌7、＃22、＃23三個(gè)系進(jìn)行潰瘍病接種試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)，接種4d后，野生型和轉(zhuǎn)基因植株均開(kāi)始發(fā)病。但前者發(fā)病率達(dá)到100％，病點(diǎn)率86％。轉(zhuǎn)基因株系＃7和＃23發(fā)病率雖然達(dá)100％，但病點(diǎn)率分別為72％和47％，較野生型低。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，野生型

3、植株病斑顯著大于＃7和＃23。轉(zhuǎn)基因株系＃22發(fā)病率為75％，病點(diǎn)率為33％，病斑大小為0.028cm2，三個(gè)參數(shù)均低于野生型檸檬。在病情指數(shù)上，轉(zhuǎn)基因檸檬三個(gè)系都明顯低于野生型。表明，轉(zhuǎn)基因植株抗?jié)儾∧芰υ鰪?qiáng)。
　　3、對(duì)轉(zhuǎn)Xa27檸檬＃5和＃25兩個(gè)系進(jìn)行潰瘍病接種試驗(yàn)。接種4d后發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因株系＃5和＃25發(fā)病率分別為50％和33.3％，病點(diǎn)率分別為14％和40％，病斑大小分別為0.019cm2和0.012cm2，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于