根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)ubiC基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)的研究.pdf

1、摘要為獲得轉(zhuǎn)ubiC基因甘藍(lán)，對植物基因工程載體的構(gòu)建、甘藍(lán)的組織培養(yǎng)以及基因轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行了研究。通過PCR方法從大腸桿菌基因組中擴(kuò)增得到了ubiC基因，擴(kuò)增產(chǎn)物克隆到pUCll8載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌JMl09。提取質(zhì)粒，連接重組到經(jīng)相同酶切的Ti質(zhì)粒pBll21上，構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBll21一ubiC，并將其轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404中。同時(shí)，采用甘藍(lán)無菌苗的下胚軸為外植體，以MS為基本培養(yǎng)基，分別用直接分化再生系統(tǒng)和愈傷再生系統(tǒng)

2、誘導(dǎo)不定芽的分化，建立了高效穩(wěn)定的再生系統(tǒng)，不定芽分化頻率達(dá)80％以上。利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)將ubiC基因轉(zhuǎn)入甘藍(lán)，通過預(yù)培養(yǎng)、侵染、共培養(yǎng)、脫菌培養(yǎng)、篩選轉(zhuǎn)化體等步驟，最后獲得抗性愈傷組織。關(guān)鍵詞：ubiC基因根癌農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化抗性愈傷碩士論文根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)ubiC基因轉(zhuǎn)化甘藍(lán)的研究1引言11植物基因工程研究進(jìn)展植物基因工程是20世紀(jì)70年代在分子生物學(xué)和植物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)上發(fā)展形成的新學(xué)科。植物基因工程就是按照事先設(shè)計(jì)的生物施工藍(lán)圖，

3、把人們所需要的某種基因(目的基因)，通過分子生物學(xué)方法，轉(zhuǎn)移到需要改造的植物細(xì)胞里，使目的基因在受體細(xì)胞中復(fù)制和穩(wěn)定表達(dá)，并再生為完整植株。該轉(zhuǎn)基因植株獲得了新性狀，如抗蟲、抗病、抗逆、高產(chǎn)等。自1983年首次獲得轉(zhuǎn)基因煙草【lJ，近20年以來，植物基因工程的研究開發(fā)和進(jìn)展十分迅速。迄今通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)已經(jīng)可以將各種來源的(包括微生物、動(dòng)物、植物)基因?qū)胫参锛?xì)胞并整合入植物基因組，獲得各種轉(zhuǎn)基因植株。國際上獲得轉(zhuǎn)基因植株的植物己達(dá)t00

4、種t21以上，包括水稻、玉米、馬鈴薯等糧食作物：棉花、大豆、油萊、亞麻、向日葵等經(jīng)濟(jì)作物；番茄、黃瓜、芥菜、甘藍(lán)、花椰菜、胡蘿h、茄子、生菜、芹菜等蔬菜作物；苜蓿、白三葉草等牧草：蘋果、核桃、李、木瓜、甜瓜、草莓等瓜果；矮牽牛、菊花、香石竹、伽藍(lán)菜等花卉；楊樹等造林樹種。轉(zhuǎn)基因植物研究取得了令人鼓舞的突破性進(jìn)展。在國際上，抗蟲、抗病、耐除草劑的轉(zhuǎn)基因棉花、玉米、大豆、馬鈴薯等已進(jìn)入商業(yè)化應(yīng)用階段，并有較大面積的推廣。1997年美國已種植

5、100萬公頃轉(zhuǎn)蘇云桿菌毒蛋白基因的抗棉鈴蟲棉花，基本上不使用或僅使用少量化學(xué)殺蟲劑，總共可減少殺蟲劑用量近40萬加倫，并可使皮棉產(chǎn)量凈增7％。兩項(xiàng)合計(jì)每公頃抗蟲棉可得凈收益83萬美元，總經(jīng)濟(jì)效益近9000萬美元。除此之外，抗蟲玉米、耐除草劑大豆和油菜的推廣面積也均在百萬公頃以上。植物基因工程除上述應(yīng)用以外，在其他方面也有廣泛的應(yīng)用前景，如目前已獲得了抗腐爛的番茄，花色改變的花卉，雄性不育的油菜等等。在國家”863”高新技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃

6、及國家科技攻關(guān)計(jì)劃的資助下，我國轉(zhuǎn)基因植物的研究和開發(fā)也取得了顯著進(jìn)展，有些研究已經(jīng)達(dá)到國際先進(jìn)水平。據(jù)1996年國家生物技術(shù)學(xué)會(huì)統(tǒng)計(jì)，我國投入研究和開發(fā)的轉(zhuǎn)基因植物達(dá)47種，涉及各類基因103種。近年來有近20種pJ轉(zhuǎn)基因植物進(jìn)入了田間試驗(yàn)或環(huán)境釋放階段。至1999年，農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)可進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)的轉(zhuǎn)基因植物有抗蟲棉花、改變花色的矮牽牛、延熟番茄、抗病毒的甜椒和番茄等。我國白行培育的抗病毒轉(zhuǎn)基因煙草具有良好的抗病毒效果，在大田栽種條件下