基因工程小肽——[gly39;14]humanin及人胰島素突變體原核表達(dá)克隆的構(gòu)建、表達(dá)及初步純化

1、山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文基因工程小肽——[Gly]-Humanin及人胰島素突變體原核表達(dá)克隆的構(gòu)建、表達(dá)及初步純化姓名：于保鋒申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：牛勃;程牛亮2003.5.20山西醫(yī)科大學(xué) 2 0 0 3 屆碩士學(xué)位論文—i ；■■●■i 暑i # ；；j 《i i i # ■| ■■■j 《■i ■i 宣日i ■葺■皇■■■目■■■o # ■一I I I ●i ■■●—■■■■■■■| ■—■_表i

2、 & 菌株B L 2 1 ( D E 3 ) - - p T X B I —H 黼及B L 2 1 ( D E 3 ) 一p T X B I ～M —i n s u l i n 均往瓿臻葬基，3 T C 、2 0 0 r p m 耩床靖葬4 小時4 5 分時進(jìn)入對數(shù)生＆中纛崩，托辯據(jù)入終濃度0 ，O l m m o l ／L 的I P T G 開始誘導(dǎo)，爵持續(xù)臻莽5 小辯可逸鯔壤又表達(dá)鬣。3 ．襲達(dá)產(chǎn)物初步純化[ G I Y “

3、卜H u m a n i n 融合綴白和人胰島索突變體融合饈白包涵體的洗滌方寨為：菌體沉淀溶r 含2 m o l ／L 尿素洗滌液，超聲( 2 0 0 W 、1 5 0 次、3秒／次、間隔3 秒) ，4 ℃、1 0 0 0 0 r p m 離心1 5 m i n 后沉淀用洗滌液充分鷲懸．一2 0 “ C 凍存過夜，次日融化屙4 “ C 、1 0 0 0 0 r p m 離心1 5 m i n ，墩上清，豫褥鰳扔步純仡的融臺蛋向，可玄除主

4、鬻的雜蛋向，融合蛋向溶解于上清液中，純度這到8 0 ％以上。4 ．活性測定采_ H J 放射免痰法。對人胰島素突變體融合蛋自初步純化產(chǎn)物，進(jìn)行放免計數(shù)。縮果：每升誘導(dǎo)培養(yǎng)后的菌液表達(dá)產(chǎn)物中．具有的放射免疫活性為0 ．5 單位?？|、論成功輸簿了p T X B I - I , I N G 及p T X B l - M - i n s u l i n 原核表達(dá)克隆，弗獲褥了離效夜迭，經(jīng)遺純蕾藝襻劐純發(fā)天≯8 0 ％的融合雖冉，弗對入胰島索突變