利用畢赤酵母表達(dá)小C肽人胰島素原的研究.pdf

1、胰島素（Insulin）是臨床治療糖尿病的特效藥，具有廣闊的應(yīng)用前景。重組人胰島素基因曾被成功地在大腸桿菌(Escherichia coli)和釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）中的表達(dá)，但是存在著難以復(fù)性和表達(dá)量較低等缺點(diǎn)。畢赤酵母（Pichia pastoris）具有嚴(yán)格調(diào)控外源蛋白的表達(dá)、加工修飾表達(dá)產(chǎn)物、表達(dá)量高、營(yíng)養(yǎng)要求低等優(yōu)點(diǎn)成為表達(dá)外源蛋白的理想表達(dá)系統(tǒng)。 本研究根據(jù)植物偏愛(ài)密碼子化學(xué)合成

2、了小C 肽人胰島素原全基因（B-(H)6LQPK-A），將該小C 肽人胰島素原基因（BC’A）插入到酵母表達(dá)載體pPICZaA中，經(jīng)線(xiàn)性化后，電擊法轉(zhuǎn)化畢赤酵母GS115，利用PCR篩選出了陽(yáng)性轉(zhuǎn)化菌株，從而成功構(gòu)建了人胰島素原的畢赤酵母表達(dá)體系。陽(yáng)性菌株經(jīng)甲醇誘導(dǎo)培養(yǎng)，發(fā)酵液上清液經(jīng)Tricine-SDS-PAGE 分析和Western blot 鑒定，發(fā)現(xiàn)3 株菌株（1＃，13＃，20＃）成功表達(dá)了人胰島素原，同時(shí)研究了20＃菌株的