利用畢赤酵母發(fā)酵表達植物甜蛋白(brazzein)的初步研究

1、北京化工大學碩士學位論文利用畢赤酵母發(fā)酵表達植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究姓名：趙紅玲申請學位級別：碩士專業(yè)：生物化工指導教師：陳勁春20040529北京化工大學碩論文利用畢赤酵母發(fā)酵表達植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究中文摘要近年來從非洲植物中提取出了一些甜味蛋白，作為一種天然非糖類的甜味劑，其具有高甜味、低熱卡、無毒安全、多功能等優(yōu)點，不會導致齲齒和肥胖癥，糖尿病患者也可以食用。但是由于提取資源有限，利用基因工程的

2、方法生產(chǎn)甜味蛋白，具有重要的現(xiàn)實意義。本文研究的植物甜蛋白(Brazzein)是甜味蛋白中分子量較小的一員，僅為64kD，由54個氨基酸殘基組成，它的相對甜度是蔗糖的2000倍，而且具有良好的熱穩(wěn)定性。已有人成功的利用大腸桿菌和轉(zhuǎn)基因植物實現(xiàn)了表達。畢赤酵母是一種可以以甲醇為唯一碳源的非常規(guī)酵母，具有強有力的AOX啟動子，可將外源基因整合到宿主的染色體上，繼代十分穩(wěn)定，蛋白可以分泌表達，實現(xiàn)高密度發(fā)酵，因此畢赤酵母是一種高效蛋白表達體系

3、。本文采用巴斯德畢赤酵母(Pichiapastori)GSll5作為宿主菌進行了表達植物甜蛋白(Brazzein)的初步研究。將含有Brazzein基因的pPIC9K穿梭質(zhì)粒電導入巴斯德畢赤酵母(Pichiapastori)GSll5中，并從22個HisMut5陽性克隆中篩選出高拷貝轉(zhuǎn)化子2個，將其誘導分泌表達的產(chǎn)物進行Tricine—SDSPAGE電泳鑒定，目標蛋白分子量與理論值一致；對發(fā)酵條件進行了優(yōu)化，采用YPG作為種子液，確定了