使用crisprcas9技術(shù)和talen技術(shù)敲除斑馬魚aftpha、sertad2a、sich73131e21.5、panel、sicnh21189o9.6、rsph3及rsph4a基因

1、分類號：Q 8 1密級：⑧∥戶單位代碼：1 0 4 2 2學(xué) 號：2 0 1 2 1 1 7 0 8蒙只番S H A N D O N GU N I V E R S I T Y碩士學(xué)位論文T h e s i sf o r M a s t e r D e g r e e( 專業(yè)學(xué)位)論文題目：使用C R I S P R ／C a s 9 技術(shù)和T A L E N 技術(shù)敲除斑馬魚a f t p h a ．．s e r t a d 2 a ．．

2、s i ：c h 7 3 —1 3 1 e 2 1 ．5 、p a n e l ，s i ：c h 2 1 1 - 8 9 0 9 ．6 、r s p h 3 及r s p h 4 a 基因K n o c k o u t o f z e b r a f i s ha f t p h a ，s e r t a d 2 a ，s i ：c h 7 3 —1 3 1 e 2 1 ．5 ．p a n e la n ds i ：c h 2 1 1

3、 —8 9 0 9 ．6g e n e b y C R I S P R ／C a s 9 a n d r s p h 3a n d r s p h 4 a g e n e b y T A L E N作者姓名 郭瀟培養(yǎng) 單 位 生命科學(xué)學(xué)院專業(yè) 名 稱指導(dǎo) 教 師合 導(dǎo) 師生物工程張燕君教授2 0 1 5 年 5 月 2 5 日山東大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要???????????????????????????????????IA 】E

4、 l S T R A C T ．??．?．．．???．?．．?．?．．?．?．???．?．?．??．?．????．?．．?．?．?．?．．??．．．??．??l l 】【符號說明??????????????????????????????????一V第一章綜述?????????????????????????????????．11 ．1 基因敲除技術(shù)概述??????????????????????????一1】．2 Z F N ( 鋅指

5、核酸酶) ?????????????????????????．．11 ．：；T A L E N 及C R I S P R ／C a s 9 ????????????????????????????????31 ．3 ．1 T A L E N ( 轉(zhuǎn)錄因子類似效應(yīng)核酸酶) ???????????????一31 ．3 ．2 C R I S P R ／C a s 9 ( 規(guī)律成簇間隔短回文重復(fù)) ?????????????51 ．3 ．3 T

6、 A L E N 和C R I S P R ／C a s 9 系統(tǒng)工具?????????????????91 ．3 ．4 T A L E N 和C I u S P R ／C a s 9 前景???????????????????9第二章使用C R I S P R ／C a s 9 敲除斑馬魚基因a f i p h a 、s e r t a d 2 a 、s i ：c h 7 3 —1 3 I e 2 1 ．5 、p a n e l 和s

7、 i ：c h 2 1 1 —8 9 0 5 1 6 ?????????????????????????????????????．．112 ．1 前言????????????????????????????????．】12 ．2 實驗材料和實驗方法?????????????????????????1 12 ．2 ．】 實驗動物???????????????????????????．1 12 ．2 ．2 載體、菌株、工具酶和試劑盒????

8、??????????????．1 22 ．2 ．3 其它試劑???????????????????????????．1 22 ．2 ．4 實驗所用儀器?????????????????????????．1 32 ．2 ．5 實驗方法???????????????????????????．1 42 ．3 結(jié)果與討論?????????????????????????????．2 92 ．3 ．1 a f l p h a 等基因序列獲得???

9、??????????????????．．2 92 ．3 ．2 確定C a s 9 靶位點及引物?????????????????????3 52 ．3 ．3 構(gòu)建g R N A 體外轉(zhuǎn)錄載體????????????????????3 92 t 3 ．4 g R N A 轉(zhuǎn)錄載體線性化?????????????????????．4 02 ．3 ．5 體外轉(zhuǎn)錄g R N A 及純化?????????????????????4 l2 ．3 ．