應用crisprcas9技術沉默muc2基因研究及其在鼠李糖乳桿菌gg株抑制大腸桿菌e.colik1株e44侵襲腸上皮細胞中的作用

1、南方醫(yī)科大學2 0 1 3 級碩士學位論文應用C R I S P R ／C a s 9 技棚M u c 2 基因研究及其在艮翰醐桿菌G G 州大腸桿菌E ．c o ／／K 1 株E 4 4 僦E 皮細胞中的作用K n o c k d o w n o f M u c 2 g e n e i nH t 2 9 b y C R I S P R ／C a s 9 a n d i t se f f e c t so n t h e i n h i

2、 b i t i o n o f E ．c o l iK 1 p e n e t r a t i o n o f t h e● ·● ’l ‘ l l ■ o ‘ i n t e s t m a l D a r r i e r D y D r o D ] o t l c s課題來源：南方醫(yī)科大學公衛(wèi)學院院長基金資助( G W 2 0 1 5 1 8 ) ；2 0 1 5年度廣東省級大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目( 2 0 1 5

3、1 2 1 2 1 0 2 6 )專 業(yè) 名學位申請指 導 教稱 病原生物學人 邱嘉文師 曹虹教授答辯委員會主席答辯委員會成員論文評閱人20 1 6 年2 月2 5 日 廣州摘要得到的一種黏蛋白核心肽基因，定位在染色體1 l p l 5 ．3 ～1 5 。5 上，是編譯分泌型黏蛋白M u c i n 2 ( M u c 2 ) 的主要基因。黏蛋白M u c 2 是主要的回結腸黏蛋白，也是構成腸道黏液層的主要成分，兼具組織特異性和細胞特異

4、性。正常時僅在小腸和空腸的杯狀細胞中有表達且表達量較低，可在腸腔的上皮表面形成一層黏液層發(fā)揮潤滑和拮抗致病菌的黏附和侵襲的作用[ 7 】。R ．M a c k 等已證實黏蛋白由上皮細胞分泌，可阻擋腸致病性大腸桿菌( e n t e r o p a t h o g e n i c E s c h e r i c h i a c o l i ，E P E C ) 接觸腸上皮細胞，避免E P E C 等黏附腸上皮細胞造成感染。C h a n

5、gC Y 等發(fā)現該黏蛋白不僅在腸化生黏膜中出現過表達，在多種上皮來源的腸道疾病和腫瘤中亦出現結構和功能質或量的改變。益生菌是～類通過改善宿主腸道微生物菌群的平衡而發(fā)揮作用的活性微生物，對改善腸道菌群結構、抑制病原菌侵襲、提高機體免疫力等方面有重要作用。國內外研究證實，益生菌可有效黏附于腸道上皮細胞，通過自身及產生代謝物和抑制物排斥致病菌。益生菌制劑抑制病原微生物黏附腸道上皮細胞多由腸道黏液素M u c 2 、M u c 3 的表達作為媒

6、介，通過加強腸內黏液素的分泌來產生空間障礙或是模仿上皮細胞的細菌結合位點進行競爭抑制。近年來我們對如何激發(fā)高效的腸道黏膜免疫應答進行了研究，發(fā)現在強化腸道屏障功能方面較有成效的長雙歧桿菌( B i f i d o b a c t e r i u m ) 、保加利亞乳桿菌( L a c t o b a c i l l u s b u l g a r i c u s )和嗜熱鏈球菌( S t r e p t o c o c c u st h

7、 e r m o p h i l u s ) 的腸道益生菌組合可顯著抑制E ．c o l iK 1 株黏附與侵襲新生大鼠腸道，從而降低腦膜炎發(fā)生率。與上述三種益生菌相比，鼠李糖乳桿菌G G ( L a c t o b a c i l l u sr h a m n o s u s G G ，L G G ) 株作為首批獲得中國衛(wèi)生部正式批準的新資源食品，能更顯著調節(jié)胃腸道菌群平衡，存活并穩(wěn)定定殖人體腸道，但在腦膜炎相關性研究中卻應用極少。因