p190蛋白在e.colik1侵襲人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的作用及其機(jī)制的研究

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文P190蛋白在E.coli K1侵襲人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的作用及其機(jī)制的研究姓名：劉東鑫申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳譽(yù)華200905致病因子出發(fā)研究致病菌與宿主細(xì)胞的相互作用是探討細(xì)菌穿過(guò)血腦屏障機(jī)制的有效途徑。I b e B 基因是我室陳譽(yù)華教授在研究E ．c o l i K 1 穿過(guò)血腦屏障機(jī)制的過(guò)程中，在E ．c o l i K 1 中克隆的一個(gè)與E ．c o l iK 1 侵襲H B M

2、 E C s 、穿過(guò)血腦屏障相關(guān)的基因；通過(guò)進(jìn)一步研究，我室人員采用酵母雙雜交技術(shù)從H B M E C se D N A 文庫(kù)中篩選出與I b e B 蛋白相互作用的P 1 9 0 蛋白。P 1 9 0 蛋白是單次跨膜糖蛋白，屬于N C P ( N e u r c x i nW - P 1 9 0 - P a r a n o d i n ) 蛋白家族，N C P 蛋白家族主要調(diào)節(jié)神經(jīng)原一膠質(zhì)細(xì)胞，膠質(zhì)細(xì)胞一膠質(zhì)細(xì)胞的相互作用。研究顯示，

3、在有髓神經(jīng)元形成過(guò)程中，P 1 9 0 蛋白與C o n t a c t i n 蛋白形成低聚物，富集在神經(jīng)元軸突細(xì)胞膜上特定區(qū)域，與髓鞘形成細(xì)胞上的配體相互作用形成結(jié)旁區(qū)( P a r ' a n o d e s ) ，從而保證神經(jīng)沖動(dòng)快速、有效的傳遞。本實(shí)驗(yàn)可望進(jìn)一步研究P 1 9 0 蛋白在細(xì)菌穿越血腦屏障過(guò)程中的作用及其引起的H B M E C s 中信號(hào)通路變化，為找到治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥性疾病的有效辦法提供理論依據(jù)

4、，以利于下一步的工作。方 法l 、P 1 9 0 蛋白在H B M E C s 中的表達(dá)情況( 1 ) 細(xì)胞培養(yǎng)H B M E C s 培養(yǎng)于含1 0 ％胎牛血清和1 0 ％新生牛血清的R P M l l 6 4 0 培養(yǎng)液。( 2 ) 應(yīng)用R T ．P C R 方法分析H B M E C s 中P 1 9 0 是否表達(dá)。( 3 ) W e s t e r n - b l o t 方法分析H B M E C s 中P 1 9 0 是否表

5、達(dá)。( 4 ) 糖苷酶處理后，W e s t e r n B l o t 檢測(cè)P 1 9 0 蛋白分子量的變化。( 5 ) P r o t e o E x t r a c tS u b c e l l u l a rP r o t e o m eE x t r a c t i o nk i t 提取H B M E C s 不同組分蛋白。W e s t e r n ．b l o t 方法分析H B M E C s 中P 1 9 0 在細(xì)胞