15796.利用hrm技術(shù)對cyp2c19基因進(jìn)行雙重snp分型和talen介導(dǎo)的小鼠p53基因敲除

1、利用H吣術(shù)對CYP2C19基因進(jìn)行雙IlSNP分型和TALEN介導(dǎo)的小豆p釕基因敲除指導(dǎo)老師：盧大儒教授指導(dǎo)小組：陳紅巖副教授陳浩明副教授范薇薇講師復(fù)旦大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院遺傳工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中文摘要第—部分應(yīng)用HRM技術(shù)對CYP2C19“2和CYP2C193進(jìn)行雙重SNP分型氯毗格雷是一種廣泛用于預(yù)防靜脈血栓形成的抗血小板藥物。研究表明，攜帶有CYP2C19基因功能缺失型等位基因CYP2C192、CYP2C193的病人，其體內(nèi)代謝氯吡格

2、雷成為其活性形式的能力降低，導(dǎo)致氯吡格雷抑制血小板聚集功能減弱。本研究旨在建立一種利用高分辨率熔解曲線分析(high—resolutionmeltingcurveanalysiS，HRM)技術(shù)在閉合單管中同時(shí)對CYP2C192、CYP2C193兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行簡便、準(zhǔn)確分型的方法。本實(shí)驗(yàn)針對兩個(gè)SNP位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)特異性的HRM引物，并在兩個(gè)位點(diǎn)引物的5’端分別加上富含AT和Gc的序列，保證兩個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增產(chǎn)物熔解峰無重疊。利用HRM技術(shù)

3、，我們快速、靈敏的對64例隨機(jī)DNA樣本的CYP2C192、CYP2C193兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行了基因分型，且HRM方法的分型結(jié)果與測序驗(yàn)證結(jié)果完全一致。因此，利用HRM技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)在閉合單管中簡便、準(zhǔn)確地對CYP2C192、CYP2C193兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行基因分型。該方法有望應(yīng)用于臨床，指導(dǎo)氯吡格雷的個(gè)體化用藥。關(guān)鍵詞：高分辨率熔解曲線分析；CYP2C192；CYP2C193：氯吡格雷：SNP分型第二部分TALEN介導(dǎo)的小鼠p53

4、基因修飾TALEN是由植物病原菌——黃單胞菌的轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)物(transcriptionactivator一1ikeeffectorsTALE)蛋白的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和FokI核酸酶的DN叫乍特異性切割結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的內(nèi)切核酸酶。TALEN可以特異性識(shí)別并切割DNA序列，引起DNA雙鏈斷裂，從而引發(fā)非同源末端連接和同源重組，目前廣泛應(yīng)用于基因定點(diǎn)修飾和定點(diǎn)突變。本課題旨在利用TALEN技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對小鼠細(xì)胞p53基因進(jìn)行定點(diǎn)修飾。我們設(shè)