人源基因載體phrn介導(dǎo)p53基因在Bel-7402中的抗癌研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌(HCC)，簡(jiǎn)稱肝癌，是一種高致命性惡性腫瘤。除早期肝癌患者外，絕大多數(shù)肝癌患者存活期不超過1年。常規(guī)治療方法除對(duì)部分早期肝癌患者有效外，對(duì)絕大多少中晚期肝癌患者療效甚微。腫瘤基因治療作為一種新的治療理念，一經(jīng)出現(xiàn)就引起研究人員的高度重視。 目的：安全、高效、靶向性好的載體是腫瘤基因治療的關(guān)鍵。本研究利用人源基因載體結(jié)合人巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子(CMVe)，人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶啟動(dòng)子(hTERTp)及腫瘤抑制基因p53構(gòu)建腫瘤抑

2、制載體，研究他們?cè)诟伟┘?xì)胞株Bel-7402中的功能。 方法：我們將CMVe與腫瘤特異性啟動(dòng)子hTERTp組合，分別結(jié)合GFP及精氨酸型和脯氨酸型腫瘤抑制基因p53，構(gòu)建GFP表達(dá)載體pchEGFP以及p53表達(dá)載體pchp53<,Arg>和pchp53<,pro>；脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株Bel-7402；24 h后利用熒光顯微鏡以及流式細(xì)胞儀檢測(cè)GFP的表達(dá)；RT-PCR、Western blotting檢測(cè)p53基因的

3、表達(dá)；利用HOECHST 33258、ANNEXIN V-FITC/PI染色，檢測(cè)p53在腫瘤細(xì)胞的促凋亡情況。 結(jié)果：GFP熒光表達(dá)載體在Bel-7402細(xì)胞中能有效表達(dá)；RT-PCR及Western blot檢測(cè)到精氨酸型和脯氨酸型p53基因在Bel-7402細(xì)胞內(nèi)表達(dá)；HOECHST33258染色及ANNEXIN V/PI染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)沒有得到明顯的細(xì)胞調(diào)亡結(jié)果。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的腫瘤抑制載體在肝癌細(xì)胞Be