Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)大黃素對(duì)大鼠CYP2C9和CYP2C19酶的影響.pdf

1、目的:
　　研究大黃素對(duì)大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)亞型CYP2C9、CYP2C19酶的誘導(dǎo)或抑制作用，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　第一部分:建立LC-MS同時(shí)測(cè)定兩種探針?biāo)幬铮妆交嵌‰搴蛫W美拉唑）在血漿內(nèi)濃度的方法
　　色譜柱:Agilent Zoxbax SB-C18柱;柱溫:30℃;流動(dòng)相:流動(dòng)相A(0.1％甲酸溶液)和流動(dòng)相B（乙腈）;采用梯度洗脫程序:0至1.5分鐘(10-8

2、5％ B)，1.5至6.0分鐘(85-85％ B)，6.0至7.0分鐘(85-10％ B)，7.0至10.0分鐘(10-10％B);流速為0.4 ml/min。質(zhì)譜條件:ESI，正離子檢測(cè)，霧化器壓力設(shè)為20psi，毛細(xì)管電壓設(shè)為3500V，干燥氣(N2)流速設(shè)為6L/min，干燥氣溫度設(shè)為350℃。使用SIM測(cè)定目標(biāo)離子:甲苯磺丁脲m/z271，奧美拉唑m/z198，卡馬西平(內(nèi)標(biāo))m/z237。定量方法采用峰面積法?？瞻籽獫{100μ

3、L于1.5mLEP管中，加入20μL甲醇，加入1μg·mL-1的內(nèi)標(biāo)工作液10μL，再加入乙腈200μL，漩渦混勻30s，接著15000r·min-1離心10min，取上清液于自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品瓶中，5μL進(jìn)樣檢測(cè)。
　　第二部分運(yùn)用Cocktail探針?biāo)幬锓ㄔu(píng)價(jià)大黃素對(duì)CYP2C9、CYP2C19酶的影響
　　健康雄性SD大鼠12只隨機(jī)分成2組，每組6只，分為對(duì)照組和試驗(yàn)組。試驗(yàn)組大鼠每日灌胃給予大黃素50mg·kg-1，持

4、續(xù)7天;對(duì)照組大鼠每日灌胃給予玉米油10ml·kg-1，持續(xù)7天。于第8天灌胃給予兩種探針?biāo)幬锛妆交嵌‰?CYP2C9)3mg·kg-1、奧美拉唑(CYP2C19)15mg·kg-1。分別于給藥開始前、給藥后0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、5、6、8、12、24h采集尾靜脈血0.3ml。液質(zhì)聯(lián)用色譜法分析各點(diǎn)探針?biāo)幯帩舛?，用藥物與統(tǒng)計(jì)軟件Drug And Statisticsversion2.0(DAS

5、)分析藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)皆用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差（x±SD）表示，用Statistical Product and Service Solutions version19.0(SPSS)軟件對(duì)各項(xiàng)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組之間的比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05，并繪制藥物濃度—時(shí)間曲線。
　　結(jié)果:
　　1.探針?biāo)幬锛觾?nèi)標(biāo)卡馬西平血漿樣品，經(jīng)LC-MS分析測(cè)定得到的色譜圖，兩種探針?biāo)幬锱c內(nèi)標(biāo)卡馬西平分

6、離較好。保留時(shí)間甲苯磺丁脲為4.6min，奧美拉唑?yàn)?.2min，卡馬西平為3.7min。奧美拉唑在5～1000ng/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢測(cè)下限為5ng/ml。甲苯磺丁脲在100～10000ng/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，檢測(cè)下限為100ng/ml。低、中、高濃度兩種探針?biāo)幬飵缀醪皇芑|(zhì)效應(yīng)干擾，低、中、高濃度兩種探針?biāo)幬锶諆?nèi)精密度RSD和日間精密度RSD均小于7％。低、中、高濃度兩種探針?biāo)幬锏南鄬?duì)回收率均在90～105％，

7、絕對(duì)回收率均大于80％。血漿樣品在室溫放置和冰凍保存的條件下，均有很好的穩(wěn)定性。本方法具有較高的專屬性。
　　2.對(duì)照組、試驗(yàn)組甲苯磺丁脲血藥濃度曲線下面積AUC(0-t)分別為(91825.387±12236.976)ng·mL-1·h和（126325.146±13579.534)ng·mL-1·h,AUC(0-∞)分別為(105500.398±10443.67)ng·mL-1·h和（148558.54±22779.076）ng

8、·mL-1·h;半衰期（t1/2z）分別為（8.099±2.483）h和（8.587±2.117）h;達(dá)峰時(shí)間（Tmax）分別為（3.792±2.542）h和(6.833±2.858)h;清除率(Clz/F)分別為(0.029±0.003) L·h-1·kg-1和(0.021±0.003) L·h-1·kg-1;血藥濃度峰值（Cmax）分別為（6776.485±1061.916）ng·mL-1和(7970.035±1384.337)ng

9、·mL-1。試驗(yàn)組甲苯磺丁脲的AUC(0-t)和AUC(0-∞)顯著大于對(duì)照組(P＜0.05)，Clz/F顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，兩組t1/2z、Tmax、Cmax比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　對(duì)照組、試驗(yàn)組奧美拉唑血藥濃度曲線下面積AUC(0-t)分別為(520.109±166.714)ng·mL-1·h和（549.472±225.291）ng·mL-1·h，AUC(0-∞)分別為（537.463±164.90

10、6）ng·mL-1·h和(582.055±221.533)ng·mL-1·h;半衰期(t1/2z)分別為(1.891±0.512)h和(1.791±0.431)h;達(dá)峰時(shí)間（Tmax）分別為（0.222±0.068）h和（0.183±0.091）h;清除率(Clz/F)分別為(30.289±9.575) L·h-1·kg-1和(28.650±9.587) L·h-1·kg-1;血藥濃度峰值（Cmax）分別為（762.124±180.42