CYP2C9基因多態(tài)性對氟比洛芬體外代謝的影響.pdf

1、目的:
　　通過建立以氟比洛芬為底物的體外代謝體系，采用高效液相色譜-紫外檢測方法，研究健康正常人群細(xì)胞色素P4502C9基因多態(tài)性對氟比洛芬體外代謝的影響，考察CYP2C9野生型以及其他變異型的重組酶對氟比洛芬體外代謝的影響差異，為臨床合理使用氟比洛芬提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論指導(dǎo)。
　　方法:
　　1、氟比洛芬及其代謝物4-羥基氟比洛芬的測定采用ZORBAX SB-C18色譜柱分離;流動(dòng)相為乙腈-水-0.1％TFA梯度洗

2、脫;流速為1mL/min，柱溫40℃;檢測波長280nm。
　　2、建立氟比洛芬重組酶的孵育體系，300μ1體系中包含5～160μmol/L的氟比洛芬和各變異型的重組酶，37℃水浴中孵育12分鐘后，終止反應(yīng)。樣品經(jīng)處理后，提取氟比洛芬及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)高效液相檢測，得出代謝產(chǎn)物(4-羥基氟比洛芬)的生成量。通過GraphPad5.0作圖，求出CYP2C9野生型以及其他變異型重組酶的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)(Km和Vmax)，通過計(jì)算獲得其清除率

3、。得出羥基氟比洛芬的相對清除率后，將其與氯沙坦代謝物的相對清除率進(jìn)行比較，得出相同之處和不同之處。
　　結(jié)果:
　　1、實(shí)驗(yàn)表明，氟比洛芬在2.5～320μmol/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.999)，4-羥基氟比洛芬在0.1～50μmol/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.993)，定量下限氟比洛芬為2.5μmol/L，4-羥基氟比洛芬為0.1μmol/L。氟比洛芬和4-羥基氟比洛芬的日內(nèi)、日間精密度的RSD均小

4、于15％;提取回收率均大于65％，穩(wěn)定性的RSD均小于10％。
　　2、相對于CYP2C9野生型(CYP2C9*1)重組酶，各變異型重組酶的代謝活性均發(fā)生了改變，Km和Vmax都有不同程度的變化。除CYP2C9*53和CYP2C9*56，其他各變異型的清除率明顯低于野生型的清除率。其中，以下這些變異型活性介于CYP2C9*2與野生型之間:CYP2C9*34，*37，*38，*44，*46，*47，*48，*50，*51和*54;

5、CYP2C9*11,*14,*27,*29,*36,*40,*41,*49和*55介于CYP2C9*2和CYP2C9*3之間，其余變異型的活性更弱。另外，*33和*43由于活性太弱，生成的代謝物濃度太低，因而無法檢測其代謝產(chǎn)物。與氯沙坦代謝物比較，個(gè)別型差異很大，比如*36型。
　　結(jié)論:
　　1、本實(shí)驗(yàn)建立的檢測體外代謝的氟比洛芬及其代謝物濃度的高效液相色譜法，操作簡便，分離完全，結(jié)果可靠，可用于藥物代謝動(dòng)力學(xué)分析。