斑馬魚Mylz2啟動(dòng)子的克隆和轉(zhuǎn)熒光蛋白基因斑馬魚、唐魚的構(gòu)建.pdf

1、近年來，轉(zhuǎn)基因魚研究取得長(zhǎng)足進(jìn)步，外源蛋白在轉(zhuǎn)基因魚中的表達(dá)量得到顯著提高，初步突破了轉(zhuǎn)基因魚走向市場(chǎng)的技術(shù)障礙。轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因青()首先實(shí)現(xiàn)了商品化，轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因斑馬魚在美國(guó)獲準(zhǔn)進(jìn)入觀賞魚市場(chǎng)，向采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育觀賞魚新品種邁出了重要的一步。唐魚是我國(guó)特有的小型鯉科魚類，在觀賞魚界占有重要地位。為了探討開發(fā)具有較高觀賞價(jià)值的轉(zhuǎn)基因唐魚的可行性，本研究嘗試?yán)棉D(zhuǎn)基因技術(shù)，分別將紅色和綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)入斑馬魚和唐魚受精卵，并

2、使其在肌肉組織特異性高效表達(dá)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因唐魚在普通光下體色呈現(xiàn)鮮紅色，肉眼可見熒光，與野生型有明顯區(qū)別，在紫外光下則發(fā)出強(qiáng)熒光，觀賞價(jià)值得到明顯的提高，為利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)開發(fā)新的觀賞魚品種打下了基礎(chǔ)。1.斑馬魚肌球蛋白輕鏈2(mylz2)啟動(dòng)子的克隆及熒光蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建　　采用PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))方法，從斑馬魚基因組DNA中分離得到了斑馬魚肌球蛋白輕鏈2啟動(dòng)子基因。該啟動(dòng)子為肌肉特異性啟動(dòng)子，大小為1936bp

3、，包含了1個(gè)TATA框、4個(gè)MEF2結(jié)合位點(diǎn)和6個(gè)與bHLH轉(zhuǎn)錄因子相結(jié)合的E-框(CANNTG)?！　〔捎蔑@微注射方法，將線性化的綠色熒光蛋白表達(dá)載體(pEGFP-mylz2)和紅色熒光蛋白表達(dá)載體(pDsRed-mylz2)分別導(dǎo)入斑馬魚和唐魚受精卵中，獲得了轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因斑馬魚(出膜率為52.8％，觀察到熒光的胚胎數(shù)占注射存活胚胎總數(shù)的7.2％)、轉(zhuǎn)紅色熒光蛋白基因斑馬魚(出膜率為47.0％，觀察到熒光的胚胎數(shù)占注射存活胚胎