轉(zhuǎn)基因系構(gòu)建斑馬魚胰島β細(xì)胞發(fā)育模型的建立.pdf

1、目的：本課題旨在利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，構(gòu)建活體的胰島β細(xì)胞綠色熒光可示蹤的斑馬魚系，從而為在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步破壞胰島β細(xì)胞，建立活體的胰島β細(xì)胞可示蹤的，可供高通量藥物篩選的糖尿病胰島β細(xì)胞破壞模型作出前期準(zhǔn)備。 方法：通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)，PCR技術(shù)、分子克隆等方法，建立GFP標(biāo)記胰島B細(xì)胞的遺傳學(xué)轉(zhuǎn)基因斑馬魚品系；活體呈像動態(tài)示蹤胰島B細(xì)胞的起源和成熟；全胚胎原位雜交和基因組PCR證實GFP陽性細(xì)胞與內(nèi)源性胰島B細(xì)胞共定位。 結(jié)果

2、：1.獲得INS部分啟動子的克隆和重組質(zhì)粒INS：GFP，顯微鏡注射建立生殖系胰島素轉(zhuǎn)基因斑馬魚。 2.通過生殖系轉(zhuǎn)基因斑馬魚的篩選和熒光觀察，24hpf GFP標(biāo)記的胰腺β細(xì)胞群被探測到位于第二、三體節(jié)下方中線兩側(cè)的單一的橢圓形實體。隨著斑馬魚胚胎的發(fā)育，胰腺逐漸增大并向右遷移，72hpf可以觀察到胰腺β-細(xì)胞位于腹中線的右側(cè)。卵黃囊消失后，120hpf明顯看到胰腺右偏，同時下移到魚鰾下方的十二指腸背側(cè)。 3. 全基因