水稻黑條矯縮病毒毒質(zhì)的形成及其生物學(xué)功能研究.pdf

1、水稻黑條矮縮病毒(Rice black-streaked dwarf virus，RBSDV)是斐濟(jì)病毒屬的成員，侵染玉米和水稻后給亞洲地區(qū)玉米和水稻生產(chǎn)帶來(lái)巨大損失。RBSDV由昆蟲(chóng)介體灰飛虱傳播，能夠在植物宿主和昆蟲(chóng)介體中復(fù)制。雙層衣殼內(nèi)包裹著病毒的10條基因組dsRNAs(S1-S10)，編碼至少12個(gè)蛋白，其蛋白名稱(chēng)依照各自對(duì)應(yīng)的基因組片段而命名(P1-P10)。同其它斐濟(jì)病毒成員一樣，RBSDV的復(fù)制與裝配是在細(xì)胞質(zhì)病毒包涵體

2、結(jié)構(gòu)（通常被稱(chēng)作毒質(zhì)）里進(jìn)行。RBSDV的第9條片段(S9)的第一個(gè)閱讀框（ORF）編碼的蛋白P9-1是形成毒質(zhì)的關(guān)鍵蛋白，但是毒質(zhì)內(nèi)部其他蛋白或內(nèi)部成分之間的相互作用我們還知之甚少。將P9-1與綠色熒光蛋白(GFP)融合后，在本氏煙草的表皮細(xì)胞中單獨(dú)表達(dá)，用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)P9-1可以形成包涵體結(jié)構(gòu)。同樣是在本氏煙草的表皮細(xì)胞中，運(yùn)用雙分子熒光互補(bǔ)(BiFC)實(shí)驗(yàn)證明了P9-1具有自我互作的能力。我們通過(guò)P9-1的免疫共沉

3、淀(CO-IP)實(shí)驗(yàn)分析表明RBSDV的非結(jié)構(gòu)蛋白P6與P9-1存在互作。通過(guò)桿狀病毒在草地夜蛾（spodoptera frugiperda，sf9）細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中的雙分子熒光互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示P6與9-1互作、P5-1與P6互作。免疫電鏡分析顯示非結(jié)構(gòu)蛋白P5-1、P6和P9-1共定位于高電子密度的包涵體結(jié)構(gòu)，這表明P5-1與P6是毒質(zhì)的結(jié)構(gòu)成分。在sf9細(xì)胞中單獨(dú)表達(dá)P6時(shí)，P6是彌散分布在細(xì)胞質(zhì)的，但是當(dāng)它與P9-1共表達(dá)時(shí)，則會(huì)