水稻黑條矮縮病毒分子生物學(xué).pdf

1、漸；工大學(xué)博士論文摘要以浙江省的水稻黑條矮縮病、河北省的小麥綠矮病和湖北省的玉米粗縮病的病毒分離物為材料，對我國3個病毒分離物進(jìn)行了系列比較研究a(3個病毒分離物粒子大小形態(tài)相似，且在血清學(xué)上密切相關(guān)；三者的介體、寄主相同，并引起相同的癥狀。提純3個病毒分離物的基因組片段，凝膠電泳顯示它們相應(yīng)的基因組片段之間大小極其相似，推測3個病毒分離物可能是同一種病毒。然后根據(jù)水稻黑條矮縮病毒(riceblackstreaked咖口礦virus，R

2、BSDV)日本分離物的S10設(shè)計一對引物，利用RTPCR技術(shù)，以3個中國分離物基因組片段S10為模板，均特異擴(kuò)增到預(yù)期大小的片段?？寺?個中國分離物基因組片段S10并測定其全序列，比較分析發(fā)現(xiàn)：3個中國分離物基因組片段S10相應(yīng)部分之間的核苷酸同源性為979％～989％，和日本RBSDV分離物基因組片段S10的相應(yīng)部分核苷酸同源性為928％一931％，和意大利的玉米粗縮病毒(maizeroughaw口rfv／rus，MRDV)基因組片段

3、SIO相應(yīng)部分的核苷酸同源性分別為876％～883％，因此，3個中國分離物都應(yīng)該是RBSDV，而不是MRDV：也就是說中國不同地區(qū)發(fā)生的水稻黑條矮縮病、玉米粗縮病和小麥綠矮病都是由RBSDV引起的。緊接著在克隆基因組片段S10中間部分序列的基礎(chǔ)上，采取了一種基于RTPCR技術(shù)的簡便方法克隆了河北分離物基因組片段S7～S10、浙江分離物的s7～S10以及湖北分離物的s9～S10，并測定了它們的全序列^fEMBL／DDBJ。＼／GenBan

4、k數(shù)據(jù)庫的登錄號分別為AJ297427(RBSDVzjS7)、A3297431(RBSDV—Zjs8)、AJ297430(RBSDVzjS9)、AJ297433(RBSDVzjS10)、A3297428(ItBSDVHebS7)、AJ297432(RBSDVHebS8)、A3297429(RBSDVHebS9)、A3297434(RBSDVHebS10)、AJ291706(RBSDVHubS9)、A3291707(RBSDV—HubS1

5、0)。3個中國RBSDV之間的同源性最高(核苷酸同源性940％99O％，氨基酸同源性963％～100％)，與RBSDVJaD的同源性次之(核苷酸同源性90O％～949％，氨基酸同源性911％～986％)，與意大利MRDV的同源性較低(核苷酸同源性851％～881％，氨基酸同源性855％943％)。進(jìn)一步明確了在中國發(fā)生的小麥綠矮病、玉米粗縮病、水稻黑浙江大學(xué)博士淪文ABSTRACTThreeisolatesofplantreovimse

6、scausingseverestuntinganddarkleafsymptomsoilwheatinHebeiprovince，onriceinZhejiangprovinceandonmaizeinHubei，China，havebeencharacterizedThe、irusparticlesofthreeisolateswereabout60rimindiameterandcloselyrelatedserologically

7、TheirdsRNAelectrophoreticprofilesinagarosegelweresimilarThe3、、erebothtransmittedefficientlybytheplanthopperLaodelphaxstriatellustomaizeandricefromtheiroriginalhostsbutmaizewasnotaverysuitablehostforthevectorandⅥ’asapoors

8、ourceofvirusThefragmentscorrespondingtogenomesegmentS10ofriceblackstreaked咖萬V批(RBSDV)wereamplifiedbyRT—PCRfromthreeChineseisolatesandsequencedTherewere979％一989％identicalnucleotidesbetweenthethreeChineseisolateswhichappea

9、rtobeRBSDV(92_8％。931％identicalnucleotidestoJapaneseisolate)ratherthanmaizeroughdwarfvirus(MRD＼7)(876％。883％identicalnucleotidestoItalianisolate)Therefore，allthreeChineseisolatesshouldbeclassifiedasRBSDVThatis，thedwarfdise

10、aseonmaize，wheat，riceindifferentregioninChinaiscausedbyRBSDVAftertheinternalregionofgenomesegmentsS10ofthreeChineseisolateswasdetermined，genomesegmentsS7’SIOofRBSDV—zj，S7一S10ofRBSDVHeb，andS9～S10ofRBSDV—Hubhadbeenclonedan

11、dsequencedusingasetofstrategybasedontheRTPCRThecompletenucleotidesequencesofeachgenomesegmentwereassembledanddepositedintheGenBank／EMBL／DDBJdatabasesTheaccessionnumbersareAJ297427(RBSDVZjS7)，AJ297431(RBSDV—zjss)，AJ297430

12、(RBSDVZjS9)，AJ297433(BSDVZjS1O)，AJ297428(RBSDV—HebS7)，AJ297432(RBSDV—Hebss)，AJ297429(RBSDV—HebS9)，AJ297434(RBSDVHebS10)，AJ291706(RBSDV—HubS9)，AJ291707(RBSDVHubS10)，respectivelyGenomesegmentofthreeChineseisolatesshared94O