青薯9號(hào)高效再生體系的建立和農(nóng)桿菌介導(dǎo)ERFs轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、本研究以馬鈴薯品種青薯9號(hào)的無(wú)菌苗為外植體材料,通過(guò)對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)和再生體系的研究,系統(tǒng)的篩選愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基、外植體類(lèi)型、愈傷組織分化培養(yǎng)基等條件。并對(duì)影響植株再生和農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化的主要因素進(jìn)行了相關(guān)的研究。
　　確立了青薯9號(hào)的愈傷組織誘導(dǎo)和再生體系并且初步建立起了農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化體系。同時(shí)對(duì)幾個(gè)ERFs類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化工作。
　　1、試驗(yàn)采用莖段為外植體材料,適合愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基為

2、MS無(wú)機(jī)成分+蔗糖25g·L-1+瓊脂6g·L-1+肌醇100mg·L-1+煙酸2mg·L-1+VB60.5mg·L-1+VB10.4mg·L-1+葉酸0.25mg·L-1+生物素0.05mg·L-1+NAA3.0mg·L-1+6-BA6.0mg·L-1;最佳分化培養(yǎng)基為 MS+蔗糖25g·L-1+瓊脂8g·L-1+酶促酪蛋白水解物1g·L-1+NAA0.1mg·L-1+6-BA3.0mg·L-1+GA33.0mg·L-1+反式玉米素核

3、苷1.0mg·L-1。
　　2、在農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化過(guò)程中,較適宜的預(yù)培養(yǎng)時(shí)間為3d,較適宜的侵染時(shí)間為8~10min,共培養(yǎng)時(shí)間為3d,適宜的菌濃度為OD600=0.8~1.0左右。
　　3、殺菌劑選用頭孢噻肟鈉,在濃度為200~300mg·L-1即可抑制農(nóng)桿菌的生長(zhǎng),并且對(duì)外植體的再生沒(méi)有影響。
　　4、選擇劑卡那霉素(Kan)在愈傷組織形成階段的最適濃度為75mg·L-1,生根階段適宜濃度為:75mg·L-1;