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文檔簡介
1、本實驗室從棉花黃萎菌中發(fā)現了真菌病毒Verticilliumdahliaechrysovirus1(VdCV1),推測其中包含OvarianTumorprotease(OTU蛋白酶)基因,但對OTU基因功能尚未做實驗證實。為此,本文開展VdCV1的OTU基因對植物病毒的影響及轉基因黃萎菌研究,以期探明OTU基因在VdCV1-黃萎菌-棉花互作中的功能。
在VdCV1的OTU基因表達對植物病毒的影響研究方面,通過將OTU基因插入到
2、狗尾草花葉病毒(Foxtailmosaicvirus,FoMV)及黃瓜花葉病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)F209-Δ2b中,構建OTU基因的病毒表達載體pCB301-FoMV-OTUp193、pCB301-F209-Δ2b-OTUp193,結合實驗室已有對照載體及pCB301-F209-Δ2b-GFP、pCB301-FoMV-GFP,實驗設計農桿菌浸潤本生煙,分析OTU基因表達對FoMV病毒復制酶RdRp的RNA
3、量的影響,分析OTU基因表達對重組病毒pCB301-FoMV-GFP、重組病毒CMV的GFP表達的影響,從而分析OTU基因對病毒的作用。研究結果:Northern雜交分析表明,OTU基因對病毒FoMV的RdRp具有增強穩(wěn)定性的作用;熒光檢測及Western雜交分析表明,OTU基因表達對重組病毒pCB301-FoMV-GFP的GFP熒光表達具有增強作用,并對重組病毒CMV(F209-Δ2b-GFP,F109,F309)的GFP熒光表達也具
4、有增強作用,證明了OTU基因對病毒復制的增強作用。另外,通過Northern雜交實驗分析結果表明,OTU基因表達降低植物病程相關基因NtPR1a表達量,表明OTU基因表達降低植物的免疫力。
在轉基因黃萎菌研究方面,我們將OTU基因和小片段基因OTUp193替代載體pHMG中以Pmg1基因為啟動子的GFP基因,構建OTU基因的真菌表達載體pHMG-OTU和pHMG-OTUp193,通過農桿菌轉化法(ATM)將質粒pHMG、pHM
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