地塞米松對馬兜鈴酸誘導的HK-2細胞凋亡的影響及其機理.pdf

1、【目的】 馬兜鈴酸腎病(aristoloehic acid nephropathy，AAN)是一類因攝入含馬兜鈴酸成分的藥物或食物導致腎臟損害的一類疾病。馬兜鈴酸(aristolochic acid，AA)是馬兜鈴屬植物的主要成分。馬兜鈴屬植物在國內外都廣泛入藥使用，常用于抗風濕、利水、通絡、婦科疾病的治療。短期大量使用含AA的中草藥可出現少尿型或非少尿型急性腎衰竭。長期小劑量或短期過量服藥者可導致腎小管-間質病變，其主要病理改

2、變是快速進展性腎間質纖維化。該病所致的腎損害往往在數月或1～2年內發(fā)展到終末期腎衰竭。急性AAN可轉變成慢性AAN。目前對AAN機制研究表明，AA可致腎小管上皮細胞壞死、凋亡，小管上皮-肌成纖維細胞轉分化，AA-DNA加合物形成等。AAN的臨床表現特殊，發(fā)展較快，危害較大，用類固醇激素治療目前尚無定論，且未見有關激素治療的體外研究報道。本研究建立 AA 誘導人近端腎小管上皮細胞(HK-2)凋亡的體外模型，觀察 AA對HK-2 細胞的毒性

3、作用，并研究類固醇激素類藥地塞米松(dexamethasone，DXT)對AA 誘導的HK-2 細胞凋亡的影響及其作用機理。 【方法】 應用細胞培養(yǎng)技術培養(yǎng)HK-2細胞。應用乳酸脫氫酶(LDH)釋放試驗檢測不同濃度AA 對 HK-2細胞的直接毒性作用。利用相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)學改變。用Hoechst33258 染色法觀察不同濃度AA誘導的HK-2 細胞凋亡核形態(tài)的改變，計算細胞凋亡百分率，擬定誘導HK-2細胞凋亡的AA

4、濃度。用Hoechst33258染色法和流式細胞技術研究不同濃度DXT對AA誘導的HK-2細胞凋亡百分率的改變。用RT-PCR法檢測各組HK-2細胞Caspase-3 mRNA 表達量的改變。用分光光度法檢測各組HK-2 細胞 Caspase-3 酶活性表達的改變。 【結果】 1．高濃度AA對HK-2細胞有直接毒性作用(5、10、20、40)μg/mlAA 對 HK-2 細胞均無明顯毒性作用(P<0.05)，而(80、1

5、60)μg/mlAA對HK-2細胞有明顯直接毒性作用(P<0.001)。 2.建立AA誘導HK-2細胞凋亡的體外模型(10、20、40)μg/mLAA 均可誘導HK-2細胞凋亡，出現細胞核形態(tài)改變，周亡率增高。AA 為 40μg/mL時，細胞核形態(tài)改變最明顯和細胞凋亡比例最高(P<0.05)。故以40μg/mLAA誘導HK-2細胞凋亡，建立體外模型。 3.DXT降低AA誘導的HK-2細胞凋亡比例(0.1、1、10、100

6、)μmol/L DXT 均可顯著降低40μg/mlAA誘導的HK-2細胞凋亡百分率，并且細胞凋亡百分率隨 DXT 濃度增高呈劑量依賴性降低(P<0.05)。 4.各組HK-2細胞 Caspase-3 mRNA 表達水平無顯著差異與正常組比較，各組 HK-2 細胞 Caspase-3mRNA 表達水平無顯著差異(P>0.05)。 5.各組HK-2細胞無Caspase-3酶活性表達與正常組比較，各組HK-2細胞無Caspas