二氮嗪對新生兒窒息后血清誘導(dǎo)HK-2細胞損傷時線粒體凋亡途徑的影響.pdf

1、目的：研究二氮嗪對新生兒窒息后血清誘導(dǎo)HK—2細胞損傷時線粒體凋亡途徑的影響。 方法：以人近曲腎小管上皮細胞（HK—2）為研究對象，以200mL/L新生兒窒息后血清作為攻擊因素處理HK—2細胞。實驗將HK—2細胞共分為三組：對照組（n=8）、窒息組（n=8），二氮嗪組（n=8）。對照組：加入含100mL/L胎牛血清培養(yǎng)液，窒息組：加入等量200mL/L新生兒窒息后血清培養(yǎng)液，二氮嗪組：將二氮嗪加入等量含200mL/L新生兒窒息后

2、血清培養(yǎng)液，二氮嗪的終濃度為100μmol/L。倒置相差顯微鏡下觀察HK—2細胞的形態(tài)學(xué)改變并照相，四甲基偶氮唑藍（MTT）比色法檢測HK—2細胞活力，生物化學(xué)法檢測細胞培養(yǎng)液乳酸脫氫酶（LDH）漏出率。采用免疫組化法檢測細胞內(nèi)caspase—3的表達；間接免疫熒光雙染色法，在激光共聚焦顯微鏡下觀察觀察Omi/HtrA2在細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)位。在激光共聚焦顯微鏡下觀察線粒體膜電位的變化。 結(jié)果：（1）倒置顯微鏡下：對照組細胞貼壁良好，呈

3、鋪路石樣，為扁平的多角形，分裂相多，細胞排列緊密，連接成片，數(shù)量多。與對照組相比，窒息組細胞受損明顯，形態(tài)改變，由典型的扁平多角形細胞變?yōu)椴灰?guī)則圓形或橢圓形，細胞間空隙加大，連接松散，細胞間可見較多細胞碎片。二氮嗪組細胞損傷狀況明顯得到改善，細胞生長狀況明顯好轉(zhuǎn)，形態(tài)明顯變好，活細胞數(shù)量明顯降低；（2）窒息組細胞活力下降，乳酸脫氫酶（LDH）的漏出率增加（p<0．05）；與窒息組相比，二氮嗪組細胞活力增加，乳酸脫氫酶（LDH）的漏出率降

4、低（p<0．05）但未恢復(fù)至對照組水平；（3）與對照組相比，窒息組HK—2細胞內(nèi)caspase—3的表達明顯增加，差異有顯著性（p<0．01）與窒息組相比，二氮嗪組caspase—3的表達明顯降低，差異有顯著性（p<0．01）；（4）與對照組相比，窒息組HK—2內(nèi)Omi/HtrA2轉(zhuǎn)位率明顯增加，差異有顯著性（p<0．01）；與窒息組相比，二氮嗪組HK—2內(nèi)Omi/HtrA2轉(zhuǎn)位率明顯降低，差異有顯著性（P<0．01）；（5）與對照組相