PBR信號途徑介導(dǎo)窒息后血清誘導(dǎo)人腎小管細胞損傷的作用.pdf

1、目的:研究外周型苯二氮卓受體(PBR)對新生兒窒息后血清導(dǎo)致人近曲腎小管上皮細胞(HK-2)損傷的保護作用及機制。
　　 方法:(1)以HK-2細胞(Humanrenal.proximaltubularcells)為研究對象。(2)以新生兒重度窒息(Apgar評分小于4分)后第一天血清(20％體積分數(shù))作為攻擊因素。(3)本實驗按雙盲、隨機、對照處理原則分為四組,即正常對照組(C組)、窒息對照組(AC組)、窒息后激動劑組(AR組

2、)、窒息后拮抗劑組(AP組)。(4)檢測指標(biāo):在倒置相差顯微鏡下觀察HK-2細胞的形態(tài)學(xué)改變及生長情況,外周型苯二氮卓受體被特異性激動劑(Ro5—4864)激動后或被特異性拮抗劑(PK11195)阻斷后,用免疫組化檢測HK-2細胞內(nèi)caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表達情況。(5)統(tǒng)計學(xué)處理:所有數(shù)值以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±S)表示,各實驗組間進行單因素方差分析,組間進行LSD檢驗。P<0.05為差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。采用SPS

3、S10.0統(tǒng)計軟件完成。
　　 結(jié)果:(1)倒置相差顯微鏡下觀察HK-2細胞生長狀況:正常對照組細胞貼壁良好,透明度大,折光性強,呈扁平的多角形,分裂相多,細胞排列緊密,連接成片,數(shù)量多。窒息對照組細胞生長緩慢,細胞數(shù)量比正常對照組明顯減少,細胞形態(tài)發(fā)生改變,由典型的扁平多角形細胞變?yōu)椴灰?guī)則圓形或橢圓形,折光性減弱,輪廓增強,胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡,脂滴,顆粒樣物質(zhì),細胞間空隙加大,連接松散,細胞間可見較多細胞碎片。窒息后激動劑組細胞

4、損傷得到明顯改善,細胞貼壁良好,細胞間連接尚可,但未恢復(fù)至窒息對照組或正常對照組。而窒息后拮抗劑組細胞損傷較窒息對照組更重,細胞生長緩慢,細胞數(shù)量少,細胞間連接更松散,可見更多細胞碎片。(2)Caspase-9及Bax的表達。與正常對照組(分別為32.11±5.12,23.55±3.86)相比,窒息對照組Caspase-9(63.58+3.80)、Bax(53.23±2.89)表達明顯增加。而與窒息對照組相比,窒息后激動劑組Caspas

5、e-9(48.59±5.91)、Bax(41.52±3.65)表達明顯減少；但窒息后拮抗劑組Caspase-9(75.34±4.83)、Bax(60.28±2.97)表達明顯增加,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(3)Bcl-2的表達。與正常對照組(70.36±6.02)相比,窒息對照組(46.29+4.98)表達明顯減少；而與窒息對照組相比,窒息后激動劑組(60.45±5.26)表達明顯增加；但窒息后拮抗劑組(28.37±4.05