24p3-NGAL基因介導(dǎo)鐵轉(zhuǎn)運(yùn)對缺氧造成的腎小管上皮細(xì)胞損傷的作用.pdf

1、目的：探討24P3/NGAL基因介導(dǎo)的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)對缺氧誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法：（1)用分子克隆的方法構(gòu)建PcDNA3. l/24p3質(zhì)粒，釆用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成纖維（NIH/3T3)細(xì)胞；（2)實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證24p3在NIH/3T3細(xì)胞中基因水平的表達(dá)，ELISA驗(yàn)證24p3在NIH/3T3細(xì)胞中的蛋白水平的表達(dá)，（3)以未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的空白組和轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒組作為對照，RT-PCR檢測各組細(xì)胞

2、24p3mRNA水平，ELISA檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中24p3水平，收集各組上清液；（4)用氯化鈷缺氧誘導(dǎo)小鼠腎小管上皮（TCMK-1)細(xì)胞，用收集的NIH/3T3細(xì)胞上清液在正常鐵離子濃度下培養(yǎng)，流式細(xì)胞儀檢測各組TCMK-1細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果：（1)轉(zhuǎn)染PcDNA3. l/24p3質(zhì)粒后的NIH/3T3細(xì)胞24p3mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯增加，證實(shí)轉(zhuǎn)染成功；（2)與對照組相比，加入重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組上清液的TCMK-1組凋