姜黃素對(duì)對(duì)比劑引起的腎小管上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的:體外培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E),探討姜黃素(Curcumin,CMN)能否通過(guò)誘導(dǎo)NRK52E細(xì)胞表達(dá)血紅素氧合酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)減輕泛影葡胺所致的細(xì)胞毒性作用。
　　 方法:體外培養(yǎng)NRK52E細(xì)胞,將實(shí)驗(yàn)研究分為四部分進(jìn)行:1.將培養(yǎng)的NRK52E細(xì)胞分別以終濃度為0、50、100、200μL／mL的泛影葡胺孵育4h。檢測(cè)各組細(xì)胞的細(xì)胞活力及培養(yǎng)液中LDH活力,分析泛影葡胺

2、致NRK52E細(xì)胞毒性的量效關(guān)系。2.將培養(yǎng)的NRK52E細(xì)胞以終濃度為100μL／mL的泛影葡胺分別孵育0、2h、4h、6h,同時(shí)加設(shè)與100μL／mL泛影葡胺等滲的甘露醇孵育6h作為滲透壓對(duì)照組。檢測(cè)各組細(xì)胞活力及培養(yǎng)液中LDH活力；分析泛影葡胺致NRK52E細(xì)胞毒性的時(shí)效關(guān)系,并探明實(shí)驗(yàn)劑量的泛影葡胺所產(chǎn)生的滲透壓對(duì)細(xì)胞的影響。3.將培養(yǎng)的NRK52E細(xì)胞分別以終濃度為0、5、10、20μmol／L的CMN孵育8h,檢測(cè)各組細(xì)胞活

3、力、培養(yǎng)液中LDH活力,分析CMN是否具有細(xì)胞毒性作用。Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞HO-1表達(dá)與HO-1活力,了解CMN誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)情況。4.將培養(yǎng)的NRK52E細(xì)胞分為A、B、C、D四組,分別給予單純培養(yǎng)基、終濃度為100μL／mL泛影葡胺、終濃度為100μL／mL泛影葡胺+10μmol／L CMN、終濃度為100μL／mL泛影葡胺+10μmol／LCMN+10μmol／L ZnppⅨ四種不同方式孵育4h；檢測(cè)各組細(xì)胞

4、活力、培養(yǎng)液中LDH活力和MDA濃度；流式AnnexinⅤ-FITC／PI雙染法測(cè)定細(xì)胞凋亡率；Western blot檢測(cè)細(xì)胞bcl-2、bax表達(dá)及HO—1表達(dá)與HO-1活力。分析CMN在泛影葡胺所致的細(xì)胞損傷中是否具有保護(hù)作用及其可能的保護(hù)機(jī)制。
　　 結(jié)果:1.泛影葡胺呈時(shí)間依賴和劑量依賴性抑制NRK52E細(xì)胞活力(P<0.05)并增加培養(yǎng)液中LDH活力(P<0.05)；終濃度為100μL／mL的泛影葡胺所產(chǎn)生的滲透壓對(duì)

5、細(xì)胞無(wú)明顯損傷(P>0.05)。2.CMN終濃度在0-20μmol／L內(nèi)無(wú)明顯細(xì)胞毒性作用(P>0.05)；CMN呈濃度依賴性誘導(dǎo)NRK52E細(xì)胞HO-1表達(dá)(P<0.05)。3.與A組比較,B組、C組、D組細(xì)胞活力均明顯降低(P<0.05),培養(yǎng)液中LDH活力和MDA的含量均顯著升高(P<0.05),細(xì)胞凋亡率也明顯增高(P<0.05),對(duì)應(yīng)的細(xì)胞bcl-2及bax表達(dá)均顯著增加(P<0.05),但只有C組bcl-2／bax比值明顯升

6、高(P<0.05)；此外,盡管B、C、D組HO-1表達(dá)均明顯增加,但只有C組HO-1活力增加(P<0.05)而在D組則是明顯降低(P<0.05)。與B組及D組比較,C組NRK52E細(xì)胞活力增加(P<0.05)、培養(yǎng)液中LDH和MDA的含量降低(P<0.05)、細(xì)胞凋亡率降低(P<0.05),bcl-2、bax表達(dá)及bcl-2／bax比值明顯升高,HO-1表達(dá)及其活性也都明顯增加。D組與B組間多數(shù)指標(biāo)均無(wú)明顯差異。
　　 結(jié)論:泛