甲醛誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用及機制.pdf

1、目的：研究甲醛誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的損傷作用及其機制，以闡明內(nèi)源性甲醛在動脈粥樣硬化、糖尿病血管病變等血管內(nèi)皮功能障礙性疾病中的意義。 方法：以不同濃度的甲醛(0，5，10，20，40，80μmol/L)與HUVEC-12細(xì)胞共培養(yǎng)24小時，以過氧化氫為陽性對照組，抗氧化劑維生素C為保護(hù)組；以40μmol/L甲醛與HUVEC-12細(xì)胞共培養(yǎng)(0，4，12，24，48，72)小時。H-E染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；MTT法檢測細(xì)胞生長

2、活性；分光光度法檢測LDH漏出量；硫代巴比妥法檢測細(xì)胞上清液中MDA的量；硝酸還原酶法檢測細(xì)胞上清液中NO的含量；生化法檢測NOS的活性；免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和RT-PCR技術(shù)，觀察內(nèi)皮型一氧化氮合酶和誘生型一氧化氮合酶在蛋白和基因水平的表達(dá)。實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((-X)±S)表示，用SPSS10.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。 結(jié)果：甲醛呈濃度和時間依賴性地誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)損傷和凋亡，抑制細(xì)胞的生長活性，促進(jìn)細(xì)胞乳酸脫氫酶漏出；甲醛呈

3、濃度和時間依賴性地誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞上清液中MDA和NO的生成，24小時達(dá)高峰；甲醛呈濃度和時間依賴性地誘導(dǎo)抑制eNOS的活性及其在基因和蛋白水平的表達(dá)，誘導(dǎo)iNOS的活性及其在基因和蛋白水平的表達(dá)，24小時達(dá)高峰。HUVEC-12細(xì)胞經(jīng)100mg/L的VitC預(yù)處理30分鐘后，再與40μmol/L甲醛共培養(yǎng)24小時后，與40μmol/L甲醛處理組比較，細(xì)胞的形態(tài)學(xué)損傷減輕，細(xì)胞生長活性增加，細(xì)胞乳酸脫氫酶漏出降低；細(xì)胞上清液中MDA和NO的