核基質(zhì)蛋白在姜黃素誘導(dǎo)人永生化表皮HaCaT細(xì)胞凋亡過程中的變化研究.pdf

1、本文在鑒定姜黃素(curcumin，Cur)誘導(dǎo)人永生化表皮HaCaT細(xì)胞凋亡的基礎(chǔ)上，應(yīng)用選擇性抽提整裝透射電鏡和蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，對(duì)HaCaT細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡過程中核基質(zhì)—中間纖維系統(tǒng)的構(gòu)型變化和核基質(zhì)蛋白組成的變化進(jìn)行系統(tǒng)研究。分析鑒定與表皮細(xì)胞凋亡相關(guān)的特異核基質(zhì)蛋白，并探索它們?cè)诒砥ぜ?xì)胞凋亡過程中的調(diào)控作用，以期能夠在較為整體的水平上進(jìn)一步認(rèn)識(shí)表皮細(xì)胞凋亡及其機(jī)理，從而找出表皮細(xì)胞凋亡研究的新方向。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)7.

2、5μg/mL姜黃素處理之后，人永生化表皮HaCaT細(xì)胞的增殖受到明顯抑制，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)83.03％；細(xì)胞周期檢測(cè)出現(xiàn)亞二倍體(亞G1期)細(xì)胞峰值，細(xì)胞凋亡率達(dá)13.1％，并發(fā)生G2/M期阻滯；瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)細(xì)胞凋亡典型的DNA“梯狀”條帶；光鏡和透射電鏡觀察結(jié)果顯示，經(jīng)姜黃素誘導(dǎo)處理后的HaCaT細(xì)胞出現(xiàn)了細(xì)胞體積縮小、核質(zhì)比例減小、細(xì)胞核固縮、核內(nèi)染色質(zhì)凝聚、線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)網(wǎng)腔擴(kuò)大、出現(xiàn)凋亡小體等顯著的凋亡特征；而且與細(xì)胞

3、凋亡相關(guān)的癌基因bcl-2表達(dá)下調(diào)，抑癌基因p53、fas、bax等表達(dá)上調(diào)。選擇性抽提整裝光鏡和電鏡觀察顯示，經(jīng)姜黃素處理的HaCaT細(xì)胞的核基質(zhì)和中間纖維比對(duì)照組明顯稀疏，且分布更加不均勻，并分別與核纖層連系，形成趨于斷裂但相對(duì)還較為完整的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)；雙向凝膠電泳分析顯示在姜黃素誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡前后存在27個(gè)差異表達(dá)的核基質(zhì)蛋白，經(jīng)質(zhì)譜分析，鑒定了其中的21個(gè)蛋白，其中在凋亡的HaCaT細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)的9種蛋白鑒定為：Chape

4、ronin containing TCP1、RNA binding motif、Hypothetical proteinAt4g18230、serine proteinase inhibitor、SUMO-1-specific protease、nucleoporinNUP107、coagulation factorⅤ precursor、Apoptosis-inducing factor、Caspase3；表達(dá)下調(diào)的6種蛋白質(zhì)為L(zhǎng)MN

5、A protein、Vimentin、Glyeosyl transferase，family2、Actin、MAP/microtubule affinity-regulating kinase、translation initiation factor IF-2。誘導(dǎo)凋亡處理后新出現(xiàn)的6種蛋白質(zhì)為Alcohol dehydrogenase[NADV+]、鋅指蛋白ZNF483、MHC classⅠ antigen、M-phase phos

6、phoprotein-1、Heat shock90kDaprotein、Protein kinase D3。鑒定出的21種核基質(zhì)蛋白中除vimentin、actin，LMNAprotein，NUP107，HSP90，SUMO-4蛋白酶，ZNF483 protein，MHC classⅠ antigen，Chaperonin containing TCP1外，其余均為首次在核基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)。 研究結(jié)果表明，7.5μg/mL姜黃