姜黃素誘導胃癌細胞SGC-7901凋亡機制的研究.pdf

1、目的:通過觀察姜黃素對人胃癌細胞SGC-7901生長的影響、細胞周期改變及NF-κB、Livin、Caspase-3表達的變化，初步探討姜黃素誘導胃癌細胞 SGC-7901凋亡的可能機制。
　　方法：（1）將對數(shù)生長期的SGC-7901細胞，按每孔1000細胞加入到96孔細胞培養(yǎng)板中，接種容積為100μl；37℃、5％CO2條件下預貼壁12h后,分別加入濃度為10、20、40、60、80、100μmol/L姜黃素溶液、DMSO溶劑

2、對照組及培養(yǎng)基空白對照組各100μl，每個濃度設置5個重復孔，分別培育12h、24h、36h、48h、72h后，用CCK-8法篩選最佳藥物濃度及作用時間；（2）設置空白對照組及20μmol/L，40μmol/L，60μmol/L姜黃素濃度組，將對數(shù)生長期的SGC-7901細胞，按每孔5000細胞加入到6孔細胞培養(yǎng)板中，待細胞數(shù)量達到106/孔后，分別加入2mL1640培養(yǎng)基、20、40、60μmol/L姜黃素溶液，培育24h，用流式細胞

3、儀測出各組細胞的細胞周期和凋亡率；（3）選取空白對照組及20μmol/L，40μmol/L，60μmol/L姜黃素濃度組，提取各組細胞的蛋白，Western Blot檢測各組SGC-7901細胞中NF-κB、Livin及Caspase-3等與胃癌細胞內(nèi)抗凋亡與促凋亡蛋白表達量的變化。（4）本實驗所有實驗結(jié)果采用SPSS18.0統(tǒng)計并進行分析，對照組與實驗組采用單因素配對樣本的t檢驗，方差分析兩組及兩組以上數(shù)據(jù)結(jié)果。
　　結(jié)果：（1

4、）CCK-8檢測結(jié)果：姜黃素藥物濃度增加以及作用時間的延長，SGC-7901細胞的增殖活力值逐漸下降，與對照組比較差異具有顯著性(P<0.05)。Pearson關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果顯示：與對照組比較 SGC-7901細胞對不同濃度姜黃素具有劑量的依賴性(r=0.901，P=0.00<0.01)以及時間的依賴性(r=0.389，P=0.00<0.01)。
　?。?）流式細胞儀檢測胃癌SGC-7901細胞的周期：姜黃素作用于SGC-7901

5、細胞的藥物濃度的增加以及時間的延長，處于G1期的SGC-7901細胞數(shù)目明顯增加，且 S期的細胞數(shù)目均下降。FCM檢測20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L姜黃素溶液對SGC-7901凋亡率較對照組差異具有顯著性(P<0.05)。
　　（3）Western Blot免疫印跡分析蛋白表達，加入姜黃素藥物處理SGC-7901細胞，隨著姜黃素濃度的增高，SGC-7901細胞內(nèi)NF-κB蛋白同Livin蛋白表達水平逐漸降低，