姜黃素誘導(dǎo)食管癌EC9706細(xì)胞凋亡過(guò)程中核基質(zhì)蛋白的表達(dá)變化.pdf

1、本文在鑒定姜黃素(curcumin，Cur)誘導(dǎo)人食管癌EC9706細(xì)胞凋亡的基礎(chǔ)上，應(yīng)用選擇性抽提整裝透射電鏡和蛋白質(zhì)組學(xué)分析技術(shù)，對(duì)EC9706細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)過(guò)程中核基質(zhì)-中間纖維系統(tǒng)的構(gòu)型變化和核基質(zhì)蛋白組成變化進(jìn)行系統(tǒng)研究。分析鑒定與食管癌細(xì)胞凋亡相關(guān)的特異核基質(zhì)蛋白，并探索它們?cè)谑彻馨┘?xì)胞凋亡過(guò)程中的調(diào)控作用，以期能夠從較為整體的水平上進(jìn)一步認(rèn)識(shí)食管癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)理，從而找出食管癌細(xì)胞凋亡研究的新方向。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，

2、經(jīng)8μg/mL，姜黃素處理之后，EC9706細(xì)胞增殖受到明顯抑制，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)69.9％；細(xì)胞周期檢測(cè)出現(xiàn)亞二倍體(亞G1期)細(xì)胞峰值，細(xì)胞凋亡率達(dá)23.0％，并發(fā)生G2/M期阻滯；光鏡和透射電鏡觀察結(jié)果顯示，經(jīng)姜黃素誘導(dǎo)處理后的EC9706細(xì)胞出現(xiàn)了細(xì)胞體積縮小、核質(zhì)比例減小、細(xì)胞核固縮、核內(nèi)染色質(zhì)凝聚、線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)網(wǎng)腔擴(kuò)大、形成凋亡小體等顯著的細(xì)胞凋亡特征；而且與凋亡相關(guān)的原癌基因bcl-2表達(dá)下調(diào)，促凋亡基因p53、fa

3、s、bax等表達(dá)上調(diào)。選擇性抽提整裝光鏡和電鏡觀察顯示，經(jīng)姜黃素處理的EC9706細(xì)胞，其核基質(zhì)-中間纖維系統(tǒng)雖然還能保持較為完整的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，但纖維的數(shù)量和密度明顯比對(duì)照組稀疏，且分布更加不均勻，并有局部的纖維斷裂存在，核基質(zhì)-中間纖維系統(tǒng)整體構(gòu)型趨向于崩解；雙向凝膠電泳分析顯示在姜黃素誘導(dǎo)EC9706細(xì)胞凋亡前后存在31個(gè)差異表達(dá)的核基質(zhì)蛋白，經(jīng)質(zhì)譜分析，鑒定了其中的12個(gè)蛋白，其中在凋亡的EC9706細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)或新出現(xiàn)的蛋白有8

4、個(gè)：Ran-binding protein3-like、Mitochondrial28S ribosomal protein S30、Rho guanine nucleotide exchange factor19、Rap1 GTPase-activating protein2、Hsp70-binding protein1、2-5A-dependent ribonuclease、Adseverin、TATA element modula

5、tory factor；表達(dá)下調(diào)的蛋白質(zhì)有4個(gè)：Probable peptidyl-tRNA hydrolase、ATP synthase mitochondrial F1 complex assembly factor1、Serine protease hepsin、Cell division protein kinase6。其中除Adseverin外，其它蛋白質(zhì)均首次在核基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)。 研究結(jié)果表明，8μg/mL姜黃素對(duì)人食管