結(jié)腸癌候選糖蛋白生物標(biāo)志物的鑒定及驗(yàn)證和新型娃兒藤堿衍生物NK-007在腸炎模型中的作用及機(jī)制探討.pdf

1、結(jié)腸癌是一個(gè)重要的世界性的公共衛(wèi)生問題，新的腫瘤生物標(biāo)志物將有助于提高結(jié)腸癌病人在疾病的早期發(fā)現(xiàn)、預(yù)后或監(jiān)視。本研究主要是評估結(jié)腸癌患者組織的糖蛋白質(zhì)譜，以期發(fā)現(xiàn)潛在的糖蛋白生物標(biāo)志物。首先使用凝集素芯片比較結(jié)腸癌組織和對應(yīng)的正常組織蛋白之間糖鏈表達(dá)譜。結(jié)果表明與正常組織相比，結(jié)腸癌組織中有著廣泛的糖基化的表達(dá)，并且糖基化的強(qiáng)度較高。為了驗(yàn)證芯片的結(jié)果，使用了凝集素組織化學(xué)的方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)馬鈴薯凝集素(STL)所結(jié)合的N-乙酰氨基葡萄糖

2、(GlcNAc)的水平在結(jié)腸癌中升高，這與凝集素芯片的結(jié)果一致。為了進(jìn)一步探究N-乙酰氨基葡萄糖所結(jié)合的糖蛋白究竟是何種，首先使用凝集素親和的方法，利用磁珠為載體分離富集能與凝集素STL特異性結(jié)合的糖蛋白/糖肽，洗脫后用于液相色譜和質(zhì)譜進(jìn)行蛋白的分析和鑒定。通過蛋白質(zhì)組學(xué)定量分析，確定了72個(gè)具有高可信度的蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)當(dāng)中，有17個(gè)特異性的在結(jié)腸癌組織中檢測到，14個(gè)蛋白在腫瘤組織中顯著上調(diào)。隨后，選取兩個(gè)僅在癌組織中表達(dá)或在癌組

3、織中上調(diào)的蛋白進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證，它們分別為AnnexinA1和HSP90β。首先通過免疫沉淀加上凝集素印跡的方法用于驗(yàn)證Annexin A1和HSP90β是否是N-乙酰氨基葡萄糖化的，以及它們的糖基化水平在結(jié)腸癌和癌旁組織中的表達(dá)情況。結(jié)果證實(shí)這兩個(gè)蛋白都是N-乙酰氨基葡萄糖化的，并且糖基化的水平在結(jié)腸癌組織中有著較高的表達(dá)，這與質(zhì)譜的結(jié)果一致。隨后利用免疫印跡和免疫組化的方法進(jìn)一步確定Annexin A1和HSP90β其本身在結(jié)腸癌和

4、癌旁的表達(dá)情況。結(jié)果顯示與正常組織相比，Annexin A1和HSP90β自身的蛋白表達(dá)水平在結(jié)腸癌中也較高。結(jié)論是，Annexin A1和HSP90β其自身的蛋白表達(dá)水平以及N-乙酰氨基葡萄糖化的水平在結(jié)腸癌中都有著過高的表達(dá)，其腫瘤特異性的糖鏈模式可以作為區(qū)分結(jié)腸癌癌癥患者與健康人的候選生物標(biāo)志物。
　　腸炎相關(guān)癌癥(CAC)是結(jié)腸癌的一種類型，在臨床檢測時(shí)伴有炎癥性腸病(IBD)。研究表明IBD是誘發(fā)CAC的因素之一，能夠有

5、效地預(yù)防和治療IBD成為預(yù)防腸癌的有效手段之一。在這項(xiàng)研究中，合成（±）-tylophorine malate(NK-007)，tylophorine(DCB3503)衍生物，并探討了它在葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型和乙酸誘導(dǎo)腸炎模型中的體內(nèi)抗炎效果。根據(jù)疾病活動指數(shù)(DAI)和大體腸損傷程度參數(shù)，結(jié)果顯示NK-007可以顯著抑制腸炎。為了探討NK-007的作用機(jī)制，研究了NK-007對由LPS刺激的小鼠骨髓來源的細(xì)胞以及單核