C-Flip蛋白在TRAIL誘導(dǎo)的結(jié)腸癌細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制初探.pdf

1、目的： (1)觀察腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480，HT29，HCT116的不同敏感性及三株結(jié)腸癌細(xì)胞c-Flip蛋白的基礎(chǔ)表達(dá)水平。 (2)探討P13K/Akt信號(hào)通路在TRAIL誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞c-Flip表達(dá)過(guò)程中的作用，揭示結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)TRAIL敏感性發(fā)生改變的部分機(jī)制。 方法：以結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480，HT29，HCT116為研究對(duì)象。 (1)用MTT法和流式細(xì)胞

2、術(shù)檢測(cè)不同時(shí)間(0，6，12，24，48h)和不同濃度(0，25，50，100ng/ml)的TRAIL對(duì)這3株細(xì)胞的凋亡率的影響(其中流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)100ng/ml TRAIL作用48小時(shí)的細(xì)胞凋亡率)。 (2)Western blot檢測(cè)三株細(xì)胞中c-Flip蛋白的表達(dá)水平。 (3)根據(jù)細(xì)胞株對(duì)TRAIL的不同敏感性以及c-Flip蛋白的表達(dá)水平，選取相對(duì)不敏感細(xì)胞株HT29進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，將其分為空白組；加入TRAI

3、L(100ng/ml)組；以及用特異性抑制劑ly294002預(yù)處理后加入TRAIL(100ng/ml)組。用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)3組細(xì)胞凋亡率的變化，并用Western blot檢測(cè)c-Flip蛋白表達(dá)的變化情況。 (4)用100ng/ml TRAIL分別刺激HT29細(xì)胞不同時(shí)間(0，15，30，60，120min)后，Western blot檢測(cè)磷酸化Akt表達(dá)水平的變化。 結(jié)果： (1)SW480和HCT116

4、對(duì)TRAIL相對(duì)敏感，且呈時(shí)間劑量依賴(lài)性，而HT29相對(duì)不敏感。 (2)C-Flip蛋白在三株細(xì)胞中的表達(dá)水平不同，且可能與它們對(duì)TRAIL的不同敏感性有關(guān)。 (3)將HT29細(xì)胞分為3組(分別為空白組，100ng/ml TRAIL組，ly294002+100ng/mlTRAIL組)進(jìn)行處理，結(jié)果顯示ly294002預(yù)處理組的c-Flip蛋白表達(dá)水平明顯降低，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ly294002預(yù)處理組的凋亡率明顯增加。

5、 (4)HT29細(xì)胞的p-Akt的基礎(chǔ)表達(dá)水平較高，100ng/ml TRAIL作用HT29細(xì)胞15，30，60，120min后，p-Akt蛋白的表達(dá)明顯降低，但各組間的p-Akt表達(dá)無(wú)明顯差異。 結(jié)論： (1)不同結(jié)腸癌細(xì)胞株對(duì)TRAIL有不同的敏感性：SW480和HCT116對(duì)TRAIL相對(duì)敏感，而HT29相對(duì)不敏感。 (2)通過(guò)P13K/Akt通路可下調(diào)c-Flip的表達(dá)，并使結(jié)腸癌細(xì)胞HT29對(duì)TR