丁苯酞對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血大鼠模型早期腦損傷的研究.pdf

1、目的：
　　蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachoid hemorrhage，SAH）是臨床上一種高死亡率和致殘率的常見(jiàn)疾病，約占所有卒中病例的5-7％。過(guò)去對(duì)其研究主要聚焦在SAH后的腦血管痙攣及其治療上；然而，研究表明單純治療和控制血管痙攣并不能特別有效地改善SAH的預(yù)后，近來(lái)針對(duì)SAH后早期腦損傷的研究逐漸增多，能否通過(guò)抑制SAH后早起腦損傷的發(fā)生從而降低SAH死亡率改善預(yù)后成為了研究的一個(gè)重要方向。
　　丁苯酞又名芹菜甲

2、素，最初為提取于芹菜籽的一種物質(zhì)，現(xiàn)已人工合成其消旋體，目前主要用于急性缺血性腦卒中的治療，目前研究表明其有改善腦血流量、減輕腦水腫、保護(hù)神經(jīng)，促進(jìn)患者神經(jīng)功能缺損的改善，作用于缺血性腦卒中所致腦損傷的多個(gè)病理生理環(huán)節(jié)，改善腦的能量代謝，抑制血栓形成，減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡的作用；SAH發(fā)生后亦有與缺血性卒中類似的微循環(huán)障礙、腦組織缺血等病理過(guò)程的發(fā)生，由于蛛網(wǎng)膜下腔出血發(fā)生后導(dǎo)致組織損傷的過(guò)程中的中也有類似的病理過(guò)程，目前少有將其應(yīng)用于蛛網(wǎng)

3、膜下腔出血的報(bào)道，在SAH發(fā)生的情況下，其是否能對(duì)SAH的病理發(fā)展過(guò)程產(chǎn)生干預(yù)保護(hù)作用，改善SAH的預(yù)后，目前尚未明確。因此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)將丁苯酞應(yīng)用于 SAH大鼠模型，希望能通過(guò)檢測(cè)丙二醛（MDA）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、細(xì)胞間粘附分子1（ICAM-1）以及細(xì)胞死亡情況以了解丁苯酞對(duì)SAH大鼠模型發(fā)生的早起腦損傷是否有保護(hù)作用。
　　材料和方法：
　　1、實(shí)驗(yàn)材料成年SPF級(jí)SD大鼠60只，

4、其中雌性與雄性各30只，體重250~330g，由廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，于廣州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級(jí)動(dòng)物房普通飼料喂養(yǎng)1~2周后行枕大池注血法建立蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。
　　2、實(shí)驗(yàn)方法動(dòng)物隨機(jī)分為6組，分別分假手術(shù)組、對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組，每組又根據(jù)時(shí)點(diǎn)不同分為24小時(shí)組與12小時(shí)組，每組10只，每組動(dòng)物中分別取5只用于獲取組織勻漿，余下5只進(jìn)行制作石蠟切片。對(duì)于實(shí)驗(yàn)組大鼠術(shù)后即予丁苯酞氯化鈉注射液2.5mg/kg腹腔注射，對(duì)照組

5、予等體積生理鹽水替代，空白對(duì)照組不打開(kāi)蛛網(wǎng)膜下腔與向其中注血。按對(duì)應(yīng)不同組別不同時(shí)點(diǎn)分別取腦組織勻漿與固定后獲取組織石蠟切片。所獲得的勻漿液利用硫代巴比妥酸（TBA）法測(cè)得MDA含量，雙抗體夾心法（ELISA）法測(cè)得大鼠TNF-α、IL-1β、ICAM-1含量，并同時(shí)利用BCA（bicinchoninic acid）法測(cè)得各標(biāo)本蛋白含量進(jìn)行對(duì)照。所獲得的石蠟切片利用TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl tran

6、sferase dUTP nick end labeling），末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)dUTP缺口末端標(biāo)記)熒光檢測(cè)方法得到細(xì)胞凋亡情況，并經(jīng)Image-Pro Plus6.0軟件處理獲得死亡細(xì)胞數(shù)及總細(xì)胞數(shù)目。各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果根據(jù)不同時(shí)點(diǎn)及是否給藥進(jìn)行T檢驗(yàn)及χ2檢驗(yàn)來(lái)進(jìn)行比較分析，設(shè)定當(dāng)P<0.05時(shí)認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1、死亡率：假手術(shù)組術(shù)后未出現(xiàn)大鼠死亡，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，SAH術(shù)后12小時(shí)與24小時(shí)組之

7、間p>0.05，給藥組與非給藥組之間P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、MDA：12小時(shí)假手術(shù)組與24小時(shí)假手術(shù)組MDA含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。SAH術(shù)后12小時(shí)及24小時(shí)給藥組與非給藥組MDA含量均有顯著升高，各組與假手術(shù)組相比其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），12小時(shí)給藥組與24小時(shí)給藥組，12小時(shí)對(duì)照組與24小時(shí)對(duì)照組之MDA含量有所差異，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。12小時(shí)給藥組較12小時(shí)對(duì)照組MDA

8、含量較低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。24小時(shí)給藥組較24小時(shí)對(duì)照組MDA含量亦較低。
　　3、TNF-α、IL-β及ICAM-1：假手術(shù)組12小時(shí)組與24小時(shí)組組間TNF-α測(cè)定值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SAH組12小時(shí)及24小時(shí)給藥組與非給藥組TNF-α測(cè)定值均有升高，各組與假手術(shù)組相比其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），12小時(shí)與24小時(shí)組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。12小時(shí)組實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組TNF-α含量較低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)

9、意義（P<0.05）。24小時(shí)組實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組TNF-α含量較低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　兩組假手術(shù)空白對(duì)照組組間IL-1β濃度含量測(cè)定值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SAH組12小時(shí)及24小時(shí)給藥組與非給藥組IL-β測(cè)定值均有升高，各組與假手術(shù)組相比其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），SAH組12小時(shí)與24小時(shí)組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。12小時(shí)組實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組IL-1β含量較低，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

10、24小時(shí)組實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組TNF-α均值較低，但其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　假手術(shù)空白對(duì)照組組間組織ICAM-1差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，SAH組12小時(shí)及24小時(shí)給藥組與非給藥組ICAM-1測(cè)定值均有升高，各組與假手術(shù)組相比其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），SAH組12小時(shí)與24小時(shí)組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。SAH12小時(shí)組與24小時(shí)組實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組ICAM-1均值較低，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。<

11、br>　　4、細(xì)胞死亡：12小時(shí)與24小時(shí)空白對(duì)照組都極少見(jiàn)死亡細(xì)胞，12小時(shí)對(duì)照組死亡率高于12小時(shí)實(shí)驗(yàn)組（P<0.05），24小時(shí)對(duì)照組死亡率高于24小時(shí)實(shí)驗(yàn)組（P<0.05），24小時(shí)對(duì)照組與12小時(shí)對(duì)照組相比較其死亡率增高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），24小時(shí)實(shí)驗(yàn)組較12小時(shí)實(shí)驗(yàn)組其死亡率較高（P<0.05）
　　結(jié)論：SAH發(fā)生后的早期，其腦組織中MDA、TNF-α、IL-β以及ICAM-1均有升高，這可能與SAH后