化學(xué)交聯(lián)Aβ的神經(jīng)毒性及與胰島素受體相互作用研究.pdf

1、淀粉樣蛋白β（Amyloidβ，Aβ）是阿爾茨海默癥的重要特征分子之一，同時也被認(rèn)為是該病的主要風(fēng)險因子。Aβ單體能夠進(jìn)行自我聚集形成分子量各異的多種聚集體，并通過多種方式損傷神經(jīng)系統(tǒng)，其中寡聚體Aβ與重要信號通路的受體相互作用被認(rèn)為是其發(fā)揮神經(jīng)毒性的核心方式?；瘜W(xué)交聯(lián)方法是Aβ研究中用于制備寡聚體Aβ的主要手段，但化學(xué)交聯(lián)過程是否對Aβ聚集體的性質(zhì)和神經(jīng)毒性產(chǎn)生影響尚未得到明確的闡釋;。本論文以傳統(tǒng)的非交聯(lián)方法制備的Aβ寡聚體為對照，

2、對非修飾蛋白的光催化交聯(lián)法（photo-induced cross-linking of unmodified proteins，PICUP）和Cu2+氧化交聯(lián)法制備的Aβ聚集體的性質(zhì)和神經(jīng)毒性進(jìn)行了研究;另外，已有研究報道不同的Aβ寡聚體具有不同的神經(jīng)毒性，而對于不同的Aβ寡聚體是否通過不同的途徑產(chǎn)生不同的病理作用還沒有明確的報道，本論文以神經(jīng)元胰島素受體(insulin receptor，IR)為研究對象，研究了PICUP法制備的不

3、同的寡聚體對胰島素受體分布的影響。研究結(jié)果如下
　　1)，通過控制PICUP和Cu2+氧化交聯(lián)的反應(yīng)條件，獲得了兩種不同方法制備的一定分子量范圍的Aβ聚集體，并通過透析方法除去了溶液中的交聯(lián)劑。通過tricine-SDS-PAGE檢測發(fā)現(xiàn)，不同制備方法獲得的Aβ中，Aβ單體所占總體比例存在明顯差異，不同分子量大小的Aβ寡聚體所占比例略有不同，其中PICUP法制備Aβ聚集體的效率最高，非交聯(lián)法獲得Aβ聚集體的量最低;Zeta電位檢測

4、發(fā)現(xiàn)，三種Aβ溶液的Zeta電位均處于-10～-15 mV區(qū)間，屬于具有進(jìn)一步聚集趨勢的非穩(wěn)定狀態(tài)。硫磺素T檢測表明，Cu2+氧化交聯(lián)Aβ具有遠(yuǎn)低于非交聯(lián)Aβ和PICUP-Aβ的β-片層結(jié)構(gòu)密度，顯示其可能具有不同于其他兩者的神經(jīng)毒性。
　　2)本論文使用上述3種Aβ對新生SD大鼠海馬神經(jīng)元進(jìn)行了濃度梯度處理，通過MTT檢測、流式細(xì)胞術(shù)以及Western印跡法對神經(jīng)元存活率、不同時期凋亡率以及關(guān)鍵凋亡蛋白的活化程度的檢測，比較了不

5、同方法制備的Aβ的神經(jīng)毒性。結(jié)果表明在三種Aβ中，Cu2+氧化交聯(lián)Aβ降低神經(jīng)元存活率的能力最強(qiáng)，能夠最高程度地誘導(dǎo)神經(jīng)元進(jìn)入早期/中晚期凋亡，引起了凋亡蛋白Caspase3活化程度的顯著上調(diào)，并且導(dǎo)致細(xì)胞漿中細(xì)胞色素c含量升高。然而，在Cu2+氧化交聯(lián)Aβ引起Caspase9活化的過程中，可能存在對Caspase9上游信號的調(diào)控而最終體現(xiàn)為和另外兩種Aβ相似的Caspase9活性。此外，三種Aβ都具有引起T-NOS和CAT酶活上調(diào)的能