Heme、Cu與胰島素受體多肽的結(jié)合及其催化胰島素受體硝化的研究.pdf

1、糖尿病（Diabetes mellitus）是一種嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，最為常見的是2型糖尿病，其主要特征是胰島素抵抗（Insulin resistance）。胰島素信號(hào)傳導(dǎo)與胰島素受體中β亞基上第1158、1162、1163位酪氨酸自磷酸化密切相關(guān)，一旦受到抑制，有可能導(dǎo)致胰島素抵抗。有研究發(fā)現(xiàn)在2型糖尿病患者體內(nèi)血紅素（heme）和銅的含量都異常升高，同時(shí)蛋白質(zhì)硝化的水平也異常增高，但它們之間的具體關(guān)聯(lián)機(jī)制并不十分清楚。而heme

2、和Cu2+可能在活性氧和活性氮存在下引起蛋白質(zhì)酪氨酸硝化。
　　本文中我們截取了胰島素受體β亞基上包含1158、1162、1163位酪氨酸的一條多肽（KK-1），同時(shí)也含有heme可能的結(jié)合位點(diǎn)，分別探究heme或Cu2+導(dǎo)致胰島素抵抗的可能的分子機(jī)制。首先，采用紫外光譜法、熒光淬滅法、差示脈沖伏安法證明了heme可以和KK-1結(jié)合；其次，用TMB和ABTS為底物探究了復(fù)合物(KK-1/heme)及heme的過氧化物酶活性；然后，

3、熒光光譜法檢測了雙酪酸的生成情況；最后以斑點(diǎn)印跡法分別研究了KK-1/heme/H2O2/NO2-體系及heme/H2O2/NO2-體系硝化KK-1的能力。研究結(jié)果表明，胰島素受體激酶結(jié)構(gòu)域中1126-1165位的肽KK-1與heme能夠結(jié)合且結(jié)合比例為1:2；復(fù)合物KK-1/heme比單純的heme具有更高的過氧化物酶活性，當(dāng)H2O2和NO2-存在時(shí)可引起肽KK-1酪氨酸的硝化；類似的，熒光淬滅法、差示脈沖伏安法證明Cu2+可以和KK

4、-1結(jié)合；其次，分別用BCA、香豆素檢測KK-1/Cu2+/H2O2或Cu2+/H2O2體系中Cu+、-OH的產(chǎn)生；然后，利用熒光光譜法、斑點(diǎn)印跡法分別檢測KK-1/Cu2+催化雙酪酸的生成情況、催化NO2-/H2O2體系硝化KK-1及被硝化后對(duì)KK-1磷酸化的影響。KK-1/Cu2+可促進(jìn)H2O2生成-OH，引起肽KK-1酪氨酸的硝化。1158位被硝化后的肽KK-1的磷酸化程度相比正常的肽KK-1降低了35％。
　　以上結(jié)果說明